家蠅酪氨酸酶生物化學性質(zhì)初步研究.pdf

1、本文就家蠅Muscadomestica酪氨酸酶(tyrosinase)的生物化學性質(zhì)和抑制動力學參數(shù)做了基礎(chǔ)性研究。首先對家蠅成蟲不同部位酪氨酸酶活性進行了比較，發(fā)現(xiàn)家蠅三日齡成蟲頭、胸、腹三部分酪氨酸酶的活力大小依次為：頭＞腹＞胸。不同蟲態(tài)及蟲齡家蠅酪氨酸酶的活性大小依次為：3齡幼蟲＞2齡幼蟲＞1齡幼蟲＞成蟲＞蛹。以鄰苯二酚為底物，研究了pH和溫度對酪氨酸酶活力的影響，結(jié)果表明，酶催化底物氧化均有一個最適pH區(qū)域和溫度，以家蠅3齡幼蟲

2、為例酪氨酸酶最適的pH為7.4，最適溫度為45℃。以硫酸銨、聚乙二醇-400(PEG-400)、聚乙二醇-10000(PEG-10000)、聚乙二醇-20000(PEG-20000)為沉淀劑對家蠅酪氨酸酶進行分級沉淀，結(jié)果表明，用硫酸銨和PEG-400的效果優(yōu)于PEG-10000和PEG-20000。用G-25和G-150層析柱純化10％-15％的硫酸銨沉淀(透析后的酶液)，酪氨酸酶純化倍數(shù)可達16.26倍，是單用硫酸銨純化倍數(shù)的4.3

3、7倍。不同溫度對家蠅酪氨酸酶的活性影響不同。22℃下，12h內(nèi)活性變動不大，24h后活性降低；4℃下，72h內(nèi)活性基本穩(wěn)定，此后活性開始下降；-20℃，3天后活性逐漸減?。?80℃，7天內(nèi)活性基本保持不變。對家蠅酪氨酸酶活性抑制效果最明顯是苯基硫脲，其次為對硫磷和辛硫磷；抑制動力學研究的結(jié)果表明，被對硫磷、辛硫磷抑制和對照的直線交點在第二象限，表明二者對家蠅酪氨酸酶的抑制均為混合型抑制；被苯基硫脲抑制和對照的直線相交于第三象限，也屬于混