流感病毒H-,3-N-,2-亞型毒株在Vero細胞上冷適應的研究.pdf

1、流行性感冒是由流感病毒(influenzavirus)感染導致的一種呼吸道疾病，能感染人和多種動物，其特點是短期內(nèi)突然爆發(fā)，迅速流行，具有廣泛的破壞性。目前對流感的防治主要是接種流感疫苗。市面上所用的流感疫苗是以雞胚為生產(chǎn)基質(zhì)的滅活疫苗，限于雞胚生產(chǎn)流感疫苗的局限性，開發(fā)細胞流感疫苗成為當務之急。荷蘭已批準以MDCK細胞為基礎而生產(chǎn)的流感疫苗，但目前Vero細胞是WHO積極推薦用于疫苗生產(chǎn)的細胞基質(zhì)。在流感活疫苗的研制中，冷適應減毒活疫

2、苗因為其優(yōu)越性而受到重視。本研究以Vero細胞適應的流感病毒株為基礎，在25℃進行連續(xù)傳代以期獲得冷適應病毒株，為生產(chǎn)冷適應細胞流感疫苗做相關的準備。 第一部分流感病毒在Vero細胞上25℃冷適應的探索本實驗將適應Vero細胞的流感病毒毒株在25℃培養(yǎng)，觀察病毒培養(yǎng)液中不同TPCK-胰酶濃度、NaHCO3濃度對病毒增殖的影響，篩選出25℃病毒適宜的培養(yǎng)條件。在此培養(yǎng)條件下，采用盲傳，33℃正常培養(yǎng)溫度回復培養(yǎng)以及病毒混合培養(yǎng)等多

3、種方法，25℃?zhèn)鞔囵B(yǎng)。傳代過程中病毒血凝效價逐代降低，至第7代檢測不出血凝效價，因此采用直接將病毒從33℃向25℃適應的方法未能獲得病毒冷適應株。 第二部分流感病毒在Vero細胞上的梯度冷適應33℃收獲的病毒毒種首先在28℃進行適應，待效價穩(wěn)定并持續(xù)獲得比較高的效價后將28℃適應的病毒作為毒種。轉入25℃進行適應，這種溫度梯度的適應使該毒株能夠在25℃生長的代次增加，得到一株能夠在25℃持續(xù)傳代15代以上的低水平冷適應的病毒毒