乙型流感病毒Vero細(xì)胞冷適應(yīng)株遺傳重配研究.pdf

1、流行性感冒病毒，簡稱流感病毒，屬正粘病毒科(Orthomyxoviridae)，其為有包膜的單負(fù)鏈RNA病毒，其基因組分為8個節(jié)段。根據(jù)流感病毒核蛋白(NP)和基質(zhì)蛋白(M)抗原性的差異可劃分為甲(A)、乙(B)和丙(C)三型。乙型流行性感冒病毒雖然沒有像甲型流感病毒一樣引起過人群內(nèi)的大流行，但是能通過抗原漂移，產(chǎn)生新的病毒，每年能引起世界范圍內(nèi)的季節(jié)性流行，嚴(yán)重威脅人類的健康和生命安全。因此，季節(jié)性流感疫苗由A(H1N1)、A(H3N

2、2)和乙型病毒共同組成生產(chǎn)毒株。
　　目前已上市的季節(jié)性流感疫苗主要有三類:裂解疫苗、亞單位疫苗和減毒活疫苗。流感減毒活疫苗采取滴鼻方式進(jìn)行接種，模擬病毒自然感染的途徑在呼吸道粘膜誘導(dǎo)產(chǎn)生免疫應(yīng)答，免疫保護(hù)性好。目前上市的流感減毒活疫苗，都以雞胚作為基質(zhì)生產(chǎn)。使用雞胚生產(chǎn)活疫苗，由于缺乏病毒滅活的手段，存在傳播雞源病原體的風(fēng)險。此外，雞胚較長的供應(yīng)周期制約著疫苗生產(chǎn)，尤其是突然爆發(fā)高致病性流感時，疫苗生產(chǎn)難于滿足應(yīng)對流感大流行的需

3、要。Vero細(xì)胞是WHO推薦用于生產(chǎn)人用生物制品的細(xì)胞基質(zhì)，可采用發(fā)酵罐大規(guī)模培養(yǎng)病毒。相對于雞胚培養(yǎng)，細(xì)胞培養(yǎng)病毒抗原變異小，更接近原始分離病毒。但Vero細(xì)胞不是培養(yǎng)流感病毒最敏感的基質(zhì)，不同毒株間產(chǎn)毒量差異較大，甚或不能生長復(fù)制。目前全球尚無以Vero細(xì)胞為基質(zhì)生產(chǎn)的季節(jié)性流感病毒減毒活疫苗面市。我們經(jīng)過10多年的研究，在國際上率先成功選育出一株乙型流感病毒Vero細(xì)胞冷適應(yīng)株B/Yunnan/23/2011 Vca(BVca)。

4、
　　本研究以BVca作為母本毒株，與WHO推薦的乙型流感病毒流行株B/Brisbane/60/2008 NYMC BX-35(BX-35)遺傳重配，以解決Vero細(xì)胞乙型流感病毒減毒疫苗生產(chǎn)毒株制備的瓶頸技術(shù)。試驗(yàn)研究中，使用Vero細(xì)胞冷適應(yīng)株BVca與流行株BX-35共感染Vero細(xì)胞，在重配病毒中加入抗BVca血清中和帶有母本株表面抗原HA和NA的子代病毒，經(jīng)蝕斑純化獲得帶有BX-35的表面抗原的乙型流感病毒Vero細(xì)胞冷