武漢漢族人群TLR4、RAGE基因多態(tài)性與糖尿病相關(guān)性研究及人體白色脂肪組織TLR4表達(dá)與肥胖相關(guān)性研究.pdf

1、第一部分、武漢漢族人群TLR4、RAGE基因多態(tài)性與糖尿病相關(guān)性研究。 目的: 研究武漢漢族人群TLR4基因Asp299Gly、RAGE基因1704G/T，G82S單核苷酸多態(tài)性與2型糖尿病（type 2 diabetes mellitus，T2DM）及其慢性并發(fā)癥的關(guān)系。 方法：對(duì)506名T2DM病人，182名糖耐量正常（normal glucose tolerance，NGT）的個(gè)體，運(yùn)用連接酶檢測(cè)反應(yīng)(ligase

2、 detection reaction，LDR)聯(lián)合多聚酶鏈反應(yīng)技術(shù)（polymerase chain reaction，PCR）檢測(cè)TLR4基因Asp299Gly、RAGE基因1704G/T，G82S單核苷酸多態(tài)性，并分析它們與T2DM及其慢性并發(fā)癥的關(guān)系。 結(jié)果：所有樣本未發(fā)現(xiàn)TLR4基因Asp299Gly位點(diǎn)變異，均為AA野生基因型；在T2DM和NGT個(gè)體中，1704G/T、G82S基因型和等位基因型頻率在T2DM和NGT

3、個(gè)體中的分布無(wú)明顯差異。在T2DM中，1704T等位基因者HOMA-β顯著低于704G等位基因者（1.68±0.43 VS 1.80±0.37，P=0.03），而且，1704T等位基因者高血壓的伴發(fā)率低于其他基因型(P=0.001)；82S等位基因者HOMA-β略低于G82等位基因者（1.70±0.4 VS 1.81±0.38，P=0.05），在正常對(duì)照組中未發(fā)現(xiàn)這種差異。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)82S等位基因者視網(wǎng)膜病變的發(fā)生率高于G82等位基

4、因者（43.3％VS 23.8％，P<0.001），同時(shí)未見(jiàn)這兩種基因多態(tài)性與其他慢性并發(fā)癥相關(guān)。在T2DM中，糖尿病伴視網(wǎng)膜病變組G82S表現(xiàn)為G/A+AA基因型頻率(60.6％)和A等位基因型頻率(36.4％)顯著高于T2DM不伴糖尿病視網(wǎng)膜病變組(38.8％；20.9％. P<0.05)。由1704G/T和G82S構(gòu)建的單倍體型分析發(fā)現(xiàn)G-A單倍體型發(fā)生視網(wǎng)膜病變的危險(xiǎn)顯著增加[odds ratio(OR) for 2.120，9

5、5％confidence interval(CI):1.185-3.792]。多因素logistic 回歸分析發(fā)現(xiàn)82S等位基因變異和糖尿病病程是T2DM視網(wǎng)膜病變的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(OR=2.964，95％CI:1.013-5.46，P=0.029；OR=1.013，95％CI：1.007-1.02，P<0.001)。 結(jié)論：在武漢漢族人群中，RAGE基因82S等位基因變異預(yù)示胰島B細(xì)胞功能降低，視網(wǎng)膜病變的危險(xiǎn)性增加；1704T

6、等位基因變異則預(yù)示胰島B細(xì)胞功能降低，但伴高血壓比例降低；由1704G/T和G82S構(gòu)建的單倍體型中，G-A單倍體型是發(fā)生糖尿病視網(wǎng)膜病變的基因標(biāo)記。 第二部分、人體白色脂肪組織TLR4表達(dá)與肥胖相關(guān)性研究。 目的：最新研究顯示脂肪組織在先天免疫反應(yīng)中起著一定的作用。而且，肥胖者的白色脂肪組織（white adipose tissue，WAT）具有巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)和脂肪細(xì)胞肥大的特征性變化。研究目的是確定人類(lèi)WAT中TLR4

7、蛋白質(zhì)表達(dá)，并闡明其與肥胖的代謝表型、炎癥標(biāo)志物及白色脂肪組織形態(tài)學(xué)的關(guān)系。 方法：成對(duì)摘取30位擇期膽結(jié)石摘除術(shù)的男性患者[年齡，34-60歲；體重指數(shù)（body mass index，BMI）：23.8±3.5 kg/m2]的腹部網(wǎng)膜脂肪和皮下脂肪。按標(biāo)本來(lái)源者的體重指數(shù)和空腹血糖將標(biāo)本分為正常體重組、超重非糖尿病亞組和超重糖尿病亞組。Western blot 測(cè)定WAT中TLR4的蛋白質(zhì)表達(dá)。免疫組化CD68抗體染色顯示活

8、性巨噬細(xì)胞。免疫比濁法測(cè)定血清高敏C反應(yīng)蛋白（high-sensitive C-reactive protein，hs-CRP）。顯微鏡定量分析巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)程度和脂肪細(xì)胞大小。多元線性回歸分析WAT中TLR4蛋白質(zhì)表達(dá)水平與肥胖的表型、hs-CRP及WAT形態(tài)學(xué)關(guān)系。 結(jié)果：Western blot明確人類(lèi)皮下和網(wǎng)膜WAT(omental WAT，oWAT)中有TLR4的蛋白質(zhì)表達(dá)。同一個(gè)體皮下WAT(subcutaneous

9、WAT，scWAT)中TLR4的蛋白質(zhì)表達(dá)水平顯著低于oWAT(0.20±0.03 VS 0.59±0.19，P<0.001)。超重非糖尿病亞組TLR4的蛋白質(zhì)表達(dá)水平無(wú)論oWAT和scWAT均高于正常體重組和超重糖尿病亞組(P<0.01)。超重糖尿病亞組oWAT中TLR4的表達(dá)水平亦高于正常體重組(P<0.01)。oWAT中CD68+數(shù)是scWAT的4倍(24.4±3.2 VS 6.1±2.9，P<0.001)。超重非糖尿病亞組和超重

10、糖尿病亞組oWAT和scWAT中CD68+數(shù)均高于正常體重組(P<0.01)，但超重的兩亞組間無(wú)明顯差異。超重非糖尿病亞組oWAT中平均脂肪細(xì)胞直徑及橫截面積顯著大于正常體重組(69.2±19.37μm VS 44.2±10.4μm，P=0.003；4014.1±2443.1μm2 VS 1613.4±755.6μm2，P=0.04)。多元線性回歸分析提示：oWAT中蛋白質(zhì)表達(dá)水平與oWAT中巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)程度(b’=0.635，P<0.