人乳頭瘤病毒的基因分型及HPV16亞型L1、E6和E7基因的克隆和序列分析.pdf

1、人乳頭瘤病毒是一類特異感染人皮膚、粘膜的雙鏈環(huán)狀DNA病毒，屬乳多空病毒科多瘤病毒亞科，其分子量大約為8000bp。目前已有100多種HPV亞型被鑒定，其中約40余種與人類生殖器皮膚黏膜病變有關(guān)．根據(jù)其對生殖系統(tǒng)的致癌性，可將其分為低危型和高危型，前者包括HPV6，11，40，42，43，44，54，61，70，72，81等，以HPV6,11最為常見，主要引起尖銳濕疣等良性病變；后者包括HPV16，18,31，33,35,39,45,5

2、1，52,56,58,59,68,72,82等，其中以HPV16,18最為常見，常引起惡性病變，如宮頸癌．由于HPV的致病性與其亞型密切相關(guān)，所以對其進(jìn)行檢測和分型對于臨床診斷具有重要意義． 另外，對HPV16亞型HPV病毒E6，E7，L1基因突變的研究表明特定位點(diǎn)的突變會使病毒更易誘導(dǎo)產(chǎn)生癌變及增大再次感染或從宿主免疫系統(tǒng)逃逸的機(jī)會。如HPV16型E6蛋白83位的亮氨酸殘基變?yōu)槔i氨酸(堿基突變T350G)的突變株在瑞典婦女宮頸

3、癌組織中出現(xiàn)的比例遠(yuǎn)大于野生型，一些研究認(rèn)為在部分人群中，該突變與組織癌變進(jìn)程相關(guān)。不同的變異導(dǎo)致的氨基酸的變化可影響宿主對病毒的免疫應(yīng)答，進(jìn)而與細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的危險性相關(guān)。因此對宮頸癌組織中HPV16亞型基因組突變的研究對宮頸癌疫苗研制策略及HPV致癌機(jī)理的研究也具有重要意義。目的1．探討各種婦科疾病與人乳頭瘤病毒感染的關(guān)系，建立不同婦科疾病和不同年齡段婦女人乳頭瘤病毒感染的流行病學(xué)資料庫。 2．了解中國西南地區(qū)HPV16亞型基

4、因的一級結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，為臨床診斷、治療由HPV16亞型感染引起的疾病特別是宮頸癌提供理論依據(jù)。 方法 1.應(yīng)用反向點(diǎn)雜交技術(shù)分別對疾病組1512例病人標(biāo)本和正常組500例標(biāo)本進(jìn)行HPV檢測，所得數(shù)據(jù)用SPSS13.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 2.收集宮頸癌組織標(biāo)本，針對HPV16亞型分別設(shè)計(jì)L1、E6和E7基因特異性引物，用PCR方法從宮頸癌組織中獲得各基因的全長序列，并構(gòu)建克隆載體pMD18-T，進(jìn)行序列分析，同時分別以L1、

5、E6和E7基因序列進(jìn)行進(jìn)化分析。結(jié)果1.正常組500例標(biāo)本中，陽性標(biāo)本101例，感染率為20.2％；疾病組1512例標(biāo)本中，陽性標(biāo)本523例，感染率為34.6％，其中雙重感染82例，占陽性標(biāo)本的15.7％，多重感染34例，占陽性標(biāo)本的6.5％，而高危感染340例，感染率為22.5％，占陽性標(biāo)本的65.0％，其中單純HPV16亞型感染155例，占所有陽性標(biāo)本的29.6％；不同年齡段、不同性生活史、不同婦科疾病以及不同首次性生活年齡的HPV

6、感染檢出率都有顯著性差異。 2.與德國標(biāo)準(zhǔn)株相比，四個標(biāo)本中總共發(fā)現(xiàn)20個突變位點(diǎn)，其中8個為四個標(biāo)本所共有：131(G-A)(Gly-Arg)、178(T-G)(Asp-Glu)、350(G-T)(Val-Leu)、647(A-G)(Asn-Asp)、846(T-C)(同義突變)、L1基因第966(C-T)(同義突變)、L1基因第1302(C-T)(同義突變)和L1基因第1434(A-G)(同義突變)。結(jié)論1.正常組和疾病組的

7、HPV感染率有顯著性差異(x<'2>=36.37，P<0.01)。在HPV感染的的普查當(dāng)中可以有重點(diǎn)的選擇高危人群，這樣更加有針對性，從而大大降低普查成本。 2.在所檢測的23種亞型種，高危型HPV16亞型所占比例最高，提示我們HPV16亞型對于宮頸疾病的發(fā)生具有重要的作用，需要我們對其進(jìn)行深入的研究。 3.與標(biāo)準(zhǔn)序列比較，中國成渝地區(qū)HPV16亞型L1、E6和E7基因存在一定范圍的變異，提示我們，在預(yù)防治療成渝地區(qū)婦女