結核分枝桿菌c-di-GMP代謝相關蛋白的生物化學研究.pdf

1、結核病是嚴重危害人類健康的傳染病，由結核分枝桿菌(Mycobacteriumtuberculosis，MTB)慢性感染引起，是目前傳染病中僅次于艾滋病的第二號殺手。到目前為止，包括研究最深入的結核分枝桿菌菌株H37Rv在內的多個菌株已經被測序，為我們進行結核分枝桿菌的生物學研究，以及發(fā)展新的預防治療結核方法提供了良好的基礎。
　　 環(huán)二鳥苷酸(c-di-GMP)是近十余年發(fā)現(xiàn)的細菌胞內第二信使，由二分子cGMP通過3'，5'-磷

2、酸二酯鍵連接而成，在P.aeruginosa、傷寒沙門氏菌(Salmonellatyphimurium)等G-細菌和S.aureus等G+細菌中廣泛存在。近年來，隨著微生物基因組的大規(guī)模測序，環(huán)二鳥苷酸(c-di-GMP)吸引了越來越多的關注。c-di-GMP在細胞內的水平分別受到含GGDEF結構域(二鳥苷酸環(huán)化酶活性)和EAL結構域(磷酸二酯酶活性)蛋白的正向和負向調節(jié)，是原核生物中普遍存在的多細胞行為調節(jié)因子，通過多種交叉信號網絡調

3、控生物膜形成、耐藥性、毒力因子表達等生理過程。
　　 在本論文中，我們純化表達了結核分支桿菌H37Rv中同時含有GGDEF結構域和EAL結構域的蛋白Rv1354c及其各個結構域。通過Radr實驗和體外酶活檢測，我們發(fā)現(xiàn)Rv1354c具有合成c-di-GMP和降解GTP為GDP的能力。通過對各結構域的體外酶活檢測，我們發(fā)現(xiàn)GAF結構域是該蛋白保持c-di-GMP合成酶能力所必需的；EAL結構域則獨立具有降解GTP為GDP的能力。體