血漿脂蛋白代謝紊亂的生物化學(xué)檢驗(yàn)

1、脂質(zhì)和脂蛋白代謝紊亂的生物化學(xué)檢驗(yàn),臨床檢驗(yàn)教研室龔曉華,1,,1、掌握脂及脂蛋白代謝；脂代謝紊亂常用生化檢驗(yàn)項(xiàng)目（TC、TG、HDL-C、LDL-C、LP（a）、apoA-I、aPOB）的檢測(cè)方法、參考區(qū)間及臨床意義,2、熟悉血漿脂蛋白的分類、高脂蛋白血癥的分型,3、了解血漿脂代謝相關(guān)酶的測(cè)定；臨床生化檢驗(yàn)項(xiàng)目在脂代謝紊亂診治中的應(yīng)用,本章教學(xué)要求：,2,第一節(jié) 概述,一、脂及脂蛋白相關(guān)的概念,3,（一）血漿脂蛋白的組成與結(jié)構(gòu),組成

2、：,主要由蛋白質(zhì)、三酰甘油、磷脂（PL）、游離膽固醇（FC）、膽固醇酯（CE）、游離脂肪酸（FFA）等成分組成。但其組成比例及含量卻相差很大。,相同點(diǎn)：蛋白質(zhì)+脂類(TG、PL、FC+CE),,不同點(diǎn)：(1) 蛋白質(zhì)和脂類的含量不同 (2) 蛋白質(zhì)(Apo)的種類及其含量不同,4,結(jié)構(gòu)：,大致為球形顆粒，由兩大部分組成，即疏水性的核心和親水性的表層。核心由不溶于水CE與TG組成，表層由載脂蛋白、PL及FC組成，F(xiàn)C及PL

3、的極性基團(tuán)向外露在血漿中，載脂蛋白是兼性化合物，它的疏水部分在脂蛋白中，而親水部分突出于脂蛋白顆粒的表面。,5,6,1、超速離心法：,乳糜微粒（CM）,極低密度脂蛋白（VLDL）,中間密度脂蛋白（IDL）,低密度脂蛋白（LDL）,高密度脂蛋白（HDL）,脂蛋白（a）（Lp(a)）,（二）血漿脂蛋白的分類,7,8,,各類脂蛋白顆粒的密度及體積,8,依據(jù)血漿脂蛋白分子中蛋白質(zhì)表面電荷多少的不同而分離。通?？煞殖桑?CM、pre-β-LP

4、、β-LP 、α-LP 四條區(qū)帶分別相當(dāng)于CM、VLDL 、LDL、HDL  IDL也有β移動(dòng)度，在IDL異常時(shí)可顯現(xiàn)寬β帶,2、電泳：,（一）血漿脂蛋白的分類,9,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,10,血漿脂蛋白的主要功能,1. CM 運(yùn)輸外源性TG至外周組織2. VLDL 運(yùn)輸內(nèi)源性TG至外周組織3. LDL 運(yùn)輸膽固醇至外周組織

5、，與冠心病成正相關(guān)4. HDL 從外周組織逆轉(zhuǎn)運(yùn)膽固醇至肝臟或其他組織再分布，與冠心病成負(fù)相關(guān),11,（三）載脂蛋白,脂蛋白中的蛋白部分稱為載脂蛋白(Apo)，具有結(jié)合與轉(zhuǎn)運(yùn)脂質(zhì)及穩(wěn)定脂蛋白結(jié)構(gòu)等功能，在脂蛋白代謝中具有重要的生理功能。,定義：,1. 載脂蛋白的種類與功能：,按1972年的命名方法，用英文字母順序編碼，分為ApoA、ApoB、ApoC、ApoD、ApoE等。,12,Apo種類多，類--亞類—亞亞類。 ApoA ：

6、 ApoAI、ApoAII 和 ApoAIV ApoB ： ApoB100 和 ApoB48 ApoC ： CI、CII、CIII ApoD 及 ApoE、Apo(a)、 ApoH 、ApoJ,13,分 類,（三）載脂蛋白,13,14,14,功 能,①與脂質(zhì)的親和作用而使脂質(zhì)溶于水性介質(zhì)中。②運(yùn)轉(zhuǎn)膽固醇和三酰甘油。③作為脂蛋白外殼的結(jié)構(gòu)成分，與脂蛋白外生物信息相聯(lián)系。④以配體的形式作為脂蛋白與特異受體的

7、連接物。⑤激活某些與血漿脂蛋白代謝有關(guān)的酶類,（三）載脂蛋白,15,（四）脂蛋白受體,定義,脂蛋白受體是一類位于細(xì)胞膜上的糖蛋白。它能以高度的親和方式與相應(yīng)的脂蛋白配體作用，從而介導(dǎo)細(xì)胞對(duì)脂蛋白的攝取與代謝，進(jìn)一步調(diào)節(jié)細(xì)胞外脂蛋白的水平。,16,脂蛋白受體的作用：,不僅是運(yùn)送脂蛋白至細(xì)胞所必需，也是從血和外周組織中有效清除具有潛在致動(dòng)脈粥樣硬化的脂蛋白所必需的。,種類：,主要有LDL受體、殘粒受體及清道夫受體。,17,各種脂蛋白受體

8、功能,LDL受體 不僅能識(shí)別ApoB100，也可識(shí)別ApoE，在細(xì)胞結(jié)合、攝取和降解LDL及其它含ApoB100的脂蛋白過(guò)程中起中介作用，對(duì)維持細(xì)胞和全身膽固醇平衡起重要作用。,18,殘粒受體 能識(shí)別ApoE，是清除血液循環(huán)中CM殘粒和β-VLDL殘粒的主要受體，它也能結(jié)合含ApoE的HDL。,清道夫受體 主要存在于巨噬細(xì)胞表面,介導(dǎo)修飾LDL(包括氧化LDL和?-VLDL) 從血液循環(huán)中清除。,19,脂蛋白代謝

9、以肝臟為中心,二、脂及脂蛋白的代謝,20,參與脂蛋白代謝主要關(guān)鍵酶有:LPL 、HL(HTGL)、LCAT 、HMGCoAase特殊蛋白質(zhì)有:CETP、LRP、MTTP、SREBP均參與脂類代謝的多個(gè)環(huán)節(jié)。,血漿脂蛋白代謝,21,一、外源性脂質(zhì)代謝,22,外源性代謝途徑: CM代謝 (半壽期 < 1小時(shí)),TG,CE,TG,FC,PL,FFA,,,,,,,,腸壁細(xì)胞,,HDL,CM,CM殘粒,,,第 3 步,第 1

10、步,第 2 步,23,二、內(nèi)源性脂質(zhì)代謝,1.VLDL和LDL代謝,24,,,,,,,SR-A,,,,HDL,肝外細(xì)胞,,LDL-R,,Step 1,Step 2,Step 3,內(nèi)源性代謝途徑: VLDL、IDL、LDL代謝,,巨噬細(xì)胞,25,臨床觀察發(fā)現(xiàn)，有些患者的細(xì)胞表面受體缺乏或減少，致使血漿LDL含量增多，結(jié)果是血漿膽固醇和膽固醇酯濃度升高并沉積于血管壁，促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生,表現(xiàn)在心臟則引起冠心病。由于LDL中膽固醇

11、含量升高與冠心病發(fā)病率呈正相關(guān)，所以LDL中的膽固醇稱為壞膽固醇。,26,肝外絕大多數(shù)組織分解代謝膽固醇的能力有限。 需 將膽固醇運(yùn)回肝臟, 以防在其中過(guò)多聚積。,,,,2.HDL逆向轉(zhuǎn)運(yùn)代謝,27,高密度脂蛋白運(yùn)載周圍組織中的膽固醇，再轉(zhuǎn)化為膽汁酸或直接通過(guò)膽汁從腸道排出，動(dòng)脈造影證明高密度脂蛋白膽固醇含量與動(dòng)脈管腔狹窄程度呈顯著的負(fù)相關(guān)。所以高密度脂蛋白是一種抗動(dòng)脈粥樣硬化的血漿脂蛋白，是冠心病的保護(hù)因子所以HDL中的膽固醇稱為

12、好膽固醇。,28,脂蛋白代謝示意圖,29,三、脂蛋白代謝紊亂,（一）高脂蛋白血癥 （二）低脂蛋白血癥 （三）脂蛋白代謝紊亂與動(dòng)脈粥樣硬化,30,高脂蛋白血癥是指血漿中CM、VLDL、LDL、HDL等脂蛋白有一種或幾種濃度過(guò)高的現(xiàn)象。,高脂蛋白血癥,原發(fā)性高脂蛋白血癥：是遺傳缺陷所致，如家族性高膽固醇血癥。繼發(fā)性高脂蛋白血癥：指某些原發(fā)病在病理演變過(guò)程中造成脂蛋白代謝紊亂，而繼發(fā)出現(xiàn)高脂蛋白血癥。如糖尿病、腎病綜合征、甲狀腺功能減退

13、癥等。,31,高脂蛋白血癥WHO分型及特征,32,黑線峰：正常圖形藍(lán)色峰：實(shí)際圖形,脂蛋白電泳圖譜,33,,,,,,血清外觀分析（血清冷置試驗(yàn)）,34,二、甘油三酯,三、游離脂肪酸,一、總膽固醇,七、載脂蛋白A-I,六、脂蛋白(a),十、ApoA-I /ApoB、TC／HDL-C、TG/HDL-C、LDL-C/HDL-C比值,四、高密度脂蛋白膽固醇,五、低密度脂蛋白膽固醇,十一、卵磷脂膽固醇轉(zhuǎn)移酶測(cè)定,八、載脂蛋白B,九、載脂蛋白E,

14、十二、脂蛋白脂肪酶,第二節(jié) 脂代謝紊亂的生化檢驗(yàn)項(xiàng)目與檢測(cè)方法,35,血脂、脂蛋白及載脂蛋白測(cè)定,血脂測(cè)定項(xiàng)目 TC、TG、HDL-C、LDL-C、Lp（a）、ApoAI、ApoB等。檢測(cè)項(xiàng)目的合理選擇 臨床常規(guī)血脂測(cè)定：TC、TG、HDL-C 及LDL-C這四項(xiàng)，有條件的實(shí)驗(yàn)室可測(cè)定ApoAⅠ、ApoB及Lp(a)。 特殊檢查項(xiàng)目：如Apo（AⅡ、CⅠ、CⅡ、CⅢ和E）、FFA、CETP、LPL、LCAT測(cè)定等，多用于

15、科研或臨床特殊病例研究。,36,樣本收集與貯存注意事項(xiàng),1、一般要求空腹12小時(shí)以上2、采血前必須保持安靜坐位至少5min（最好20min以上）；除臥床不起者外，采血時(shí)必須取坐位。3、止血帶使用時(shí)間必須＜1min，抽血時(shí)必須松開(kāi)止血帶，因靜脈阻滯5min，可使TC升高10%--15%。4、樣本采集后應(yīng)盡快進(jìn)行檢測(cè)，放置時(shí)間不得大于3min，24h內(nèi)不能完成測(cè)定，可密封置于2--8℃保存一周。,37,一、總膽固醇（TC）,【參考范圍

16、】 合適：6.22mmol/L,【檢測(cè)方法】,臨床常規(guī)方法推薦為酶法（COD-PAP法），衛(wèi)生部推薦的參考方法是HPLC法。,膽固醇是人體重要的脂類成分，具有重要的生理功能，如合成類固醇激素，維生素D3膽汁酸，并構(gòu)成細(xì)胞膜成分，TC包括FC（1/3）和CE（2/3），膽固醇與動(dòng)脈粥樣硬化有密切關(guān)系，故膽固醇測(cè)定是最常用的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)項(xiàng)目之一。,38,TC除了作為高膽固醇血癥的診斷指標(biāo)之外，不能作為其它任何疾病的診斷指標(biāo)，對(duì)于動(dòng)脈粥樣硬

17、化和冠心病而言，TC是一個(gè)明確的危險(xiǎn)因子，與冠心病的發(fā)病率呈正相關(guān)。,【臨床意義】,血清膽固醇升高：動(dòng)脈粥樣硬化、腎病綜合癥、肝細(xì)胞性黃疸、阻塞性黃疸及重癥糖尿病等。血清膽固醇降低：惡性貧血、溶血性貧血、甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)、急性感染，營(yíng)養(yǎng)不良等。,39,二、甘油三脂（TG）,臨床上所測(cè)的甘油三酯是血漿中各脂蛋白所含甘油三酯的總和，甘油三脂受飲食和時(shí)相的影響較大，同一個(gè)體多次測(cè)定時(shí)，也可能有較大變異，因此TG生物學(xué)變異最大。,【檢測(cè)方法】,

18、臨床常規(guī)方法推薦為酶法，衛(wèi)生部推薦的參考方法是同位素稀釋氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（ID-GC/MS）,【參考范圍】,在1.7mmol/L（150mg/dl）以下為合適范圍；1.7～2.25mmol/L（150～199mg/dl）為邊緣升高；2.26mmol/L（200mg/dl）以上為升高。,40,【臨床意義】,41,1、生理性改變：高脂飲食、肥胖、運(yùn)動(dòng)不足等2、病理性改變：輕至中度升高2.26-5.63mmol/l 患冠心病危險(xiǎn)性

19、增加重度升高≥5.63mmol/l 可伴發(fā)急性胰腺炎3、低TG血癥：＜0.56mmol/l,三、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）,常以測(cè)定HDL-C含量代表HDL水平。HDL是血清中顆粒最小密度最大的一組脂蛋白，被視為人體內(nèi)具有抗動(dòng)脈粥樣硬化的脂蛋白，同時(shí)與冠心病呈負(fù)相關(guān)，因而HDL-C被稱為好的膽固醇。,【檢測(cè)方法】,,臨床常規(guī)方法為勻相法。其原理是利用多聚體和聚陰離子在表面活性劑的作用下，對(duì)低密度、極低密度脂蛋白選擇性遮蔽的原

20、理，從而達(dá)到僅血清高密度脂蛋白中的膽固醇參與顯色反應(yīng)的方法。,42,男性：1.16--1.42mmol/L女性：1.29--1.55mmol/L合適范圍為：1.55mmol/L（60mg/dl）-1.04mmol/L（40mg/dl）升高：＞1.55mmol/L（60mg/dl）降低：＜1.04mmol/L（40mg/dl）,【參考范圍】,43,【臨床意義】,HDL-C被證實(shí)是AS和心血管疾病的保護(hù)因子，一般認(rèn)為隨著HDL-C水

21、平降低，缺血性心血管病發(fā)病危險(xiǎn)增加，HDL-C＜1.04mmol/L的人群與HDL-C≥1.55mmol/L的人群相比，缺血性心血管病危險(xiǎn)增加50%。,影響血漿（清）HDL-C水平的因素很多，主要有：①年齡和性別 ②種族 ③飲食 ④肥胖⑤飲酒與吸煙 ⑥運(yùn)動(dòng) ⑦藥物 ⑧疾病,44,HDL亞類,HDL包括多個(gè)亞類α-HDL（HDL2a、HDL2b、HDL3a、HDL3b、HDL3c）和

22、β-HDL（前β1-HDL、前β2-HDL、前β3-HDL）。HDL的兩個(gè)主要功能抗炎抗氧化和抗AS，都可能通過(guò)某些亞類特別是HDL2和HDL3發(fā)揮作用，而不是全部HDL均發(fā)揮作用。目前HDL2和HDL3的主要作用包括（1）作為評(píng)估AS的危險(xiǎn)因素，與冠心病密切相關(guān)，較總HDL好（2）HDL3在抗炎抗氧化方面發(fā)揮重要作用（3）HDL2在胰島素抵抗和肝硬化中發(fā)揮重要作用,45,四、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）,LDL-C在體內(nèi)主

23、要將內(nèi)源性脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)到外周組織利用，其水平更能反映個(gè)體的血脂水平，由于其含量升高與冠心病發(fā)病率呈正相關(guān)，所以LDL-C被稱為壞膽固醇,【檢測(cè)方法】,臨床常規(guī)方法為勻相法。,【參考范圍】,合適范圍為：4.14mmol/L（160mg/dl）,46,【臨床意義】,LDL-C是導(dǎo)致AS的主要脂類危險(xiǎn)因素。與缺血性心血管病發(fā)生相對(duì)危險(xiǎn)及絕對(duì)危險(xiǎn)上升趨勢(shì)及程度與TC相似。增高見(jiàn)于家族性高膽固醇血癥（TC增高，LDL-C增高，伴有HDL-C減低）

24、，Ⅱa型高脂蛋白血癥（TC增高，LDL-C增高，TG正常或輕度增高）。,47,五、脂蛋白（a）[Lp（a）],含有特定的載脂蛋白[Apo（a）]的脂蛋白，合成于肝臟，其脂質(zhì)組成結(jié)構(gòu)與LDL及其相似，密度介于HDL和LDL之間，其生理功能尚不清楚，可能是轉(zhuǎn)運(yùn)脂質(zhì)到組織細(xì)胞。1988年被國(guó)際專題會(huì)議公認(rèn)為動(dòng)脈硬化的獨(dú)立危險(xiǎn)因子。,【檢測(cè)方法】,免疫比濁法和ELISA,【參考范圍】,<300mg/L,48,【臨床意義】,1.生理性改變

25、 一般認(rèn)為L(zhǎng)p（a）對(duì)同一個(gè)體相當(dāng)恒定，但個(gè)體間差異很大，波動(dòng)范圍在0～1.0mg/L。Lp（a）水平高低主要由遺傳因素決定，基本不受性別、年齡、飲食、營(yíng)養(yǎng)和環(huán)境影響；2.病理性增高 缺血性心腦血管疾病 、心肌梗死、外科手術(shù) 、急性創(chuàng)傷、急性炎癥 、糖尿病腎病、腎病綜合癥、尿素癥，除肝癌以外的其他惡性腫瘤3.病理性減低 肝臟疾病（慢性肝炎除外）,49,六、載脂蛋白A-I（apoA-I）,載脂蛋白AⅠ主要存在于HDL中，在CM、V

26、LDL、LDL也有少量，主要功能是維持脂蛋白結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定和完整性。已證實(shí)ApoAⅠ是通過(guò)激活LCAT來(lái)催化膽固醇酯化，將多余的CE轉(zhuǎn)運(yùn)至肝臟處理，因此apoA-I具有清除脂質(zhì)和抗AS的作用。,【檢測(cè)方法】,免疫透射比濁法,【參考范圍】,1.20-1.60g/L,50,【臨床意義】,血清apoA-I反映血液中HDL的數(shù)量，與HDL-C呈明顯正相關(guān)，與冠心病發(fā)生危險(xiǎn)性呈負(fù)相關(guān)。冠心病患者、腦血管病患者水平降低apoA-I缺乏癥患者血清中a

27、poA-I、HDL-C水平極低糖尿病、慢性肝病、腎病綜合癥等降低apoA-I升高主要見(jiàn)于妊娠、雌激素療法、飲酒等,51,七、載脂蛋白B（apoB）,載脂蛋白B可分為兩個(gè)亞類，即ApoB48、ApoB100，前者存在于CM中，參與外源性脂質(zhì)的消化、吸收和運(yùn)輸；后者存在于VLDL、LDL中，參與VLDL的裝配和分泌，在血液中，VLDL可代謝轉(zhuǎn)化為L(zhǎng)DL。,【檢測(cè)方法】,免疫透射比濁法-常規(guī)方法,【參考范圍】,中青年：0.8-0.9g/L