藥對(duì)麻黃-附子和麻黃-桂枝的藥效學(xué)配伍機(jī)理研究.pdf

1、研究背景:
　　 藥對(duì)是臨床上常用的相對(duì)固定的配伍形式，是針對(duì)主治證候及所采用的相應(yīng)治法，根據(jù)藥物的功效及藥性特點(diǎn)，選擇性地將兩味（或兩味以上）中藥進(jìn)行配對(duì)應(yīng)用。對(duì)藥對(duì)配伍機(jī)理的研究，有助于進(jìn)一步揭示藥對(duì)配伍的客觀規(guī)律與科學(xué)內(nèi)涵，既能指導(dǎo)臨床遣方用藥，更有效地運(yùn)用已有的藥對(duì)，亦有利于針對(duì)疾病譜的變化、病證的發(fā)展而創(chuàng)制新藥對(duì)。而隨著藥對(duì)的作用機(jī)理與物質(zhì)基礎(chǔ)更加明確，在新藥研究中以有效成分或有效部位配伍已越來(lái)越多，藥對(duì)配伍的普遍規(guī)律

2、同樣可以指導(dǎo)新的配伍形式，對(duì)中藥新產(chǎn)品制劑處方研創(chuàng)具有現(xiàn)實(shí)意義。
　　 國(guó)內(nèi)常用于配伍的研究方法有析因分析法、正交分析法、均勻設(shè)計(jì)法、正交t值法、聚類(lèi)分析法、Logistic模型評(píng)價(jià)法等。這些方法各具特色，從不同的角度揭示中藥配伍應(yīng)用的機(jī)理。藥物相互作用法是藥理學(xué)在進(jìn)行藥物相互作用研究中廣泛采取的評(píng)定方法，主要包括:等效線圖法(The classical isobologram approach)、改良的等效線圖法、中效法(Th

3、e median-effect method)、效應(yīng)面法(Theuniversal response surface analysis)、方差分析法(ANOVA)、Q值法等。藥物相互作用方法是經(jīng)過(guò)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)臄?shù)學(xué)論證，具有豐富的應(yīng)用經(jīng)驗(yàn)，完備的理論體系，并且能夠給出在整個(gè)劑量范圍內(nèi)藥物的相互作用情況。將藥物相互作用評(píng)價(jià)方法引入中藥藥對(duì)配伍機(jī)理研究，能客觀評(píng)價(jià)藥對(duì)配伍是否產(chǎn)生藥理效應(yīng)的協(xié)同和拮抗，有利于在藥效學(xué)層面揭示藥對(duì)的配伍內(nèi)涵。
　

4、　 本文為國(guó)家自然科學(xué)基金重點(diǎn)項(xiàng)目“麻黃類(lèi)藥對(duì)組成規(guī)律的基礎(chǔ)研究”（項(xiàng)目批準(zhǔn)號(hào):81030066）的部分研究工作，以藥物相互作用研究方法，從藥效學(xué)角度探討麻黃-附子和麻黃-桂枝藥對(duì)的配伍機(jī)理。
　　 研究目的:
　　 通過(guò)對(duì)麻黃-附子和麻黃-桂枝藥對(duì)藥效學(xué)相互作用關(guān)系的研究，探討其配伍機(jī)理。
　　 實(shí)驗(yàn)方法:
　　 1.試驗(yàn)藥物
　　 麻黃購(gòu)自廣州市致信藥業(yè)有限公司，產(chǎn)地:吉林，批號(hào):20101

5、002;黑順片購(gòu)自四川江油中壩附子科技發(fā)展公司，批號(hào):101002;吲哚美辛片，天津力生制藥股份有限公司，批號(hào):110112;桂枝購(gòu)自廣東省藥材公司，產(chǎn)地:廣西，批號(hào):20101201;阿司匹林,舒泰神生物制藥股份有限公司，批號(hào):110701;安乃近，廣東華南藥業(yè)集團(tuán)有限公司，批號(hào):110115;干酵母，安琪酵母股份有限公司，批號(hào):1100105。
　　 2.動(dòng)物
　　 昆明種小鼠，SPF級(jí)，18-22g; SD大鼠，S

6、PF級(jí)，160-200g，雄性;由南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào):SCXK粵2006-0015。
　　 3.觀察指標(biāo)
　　 3.1.麻黃-附子藥對(duì)藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)
　　 3.1.1.麻黃-附子藥對(duì)不同配伍組急性毒性實(shí)驗(yàn)
　　 3.1.2.麻黃-附子藥對(duì)對(duì)醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響
　　 3.1.3.麻黃-附子藥對(duì)對(duì)輻射熱致小鼠甩尾反應(yīng)的影響
　　 3.1.4.麻黃-附子藥對(duì)相互作用實(shí)驗(yàn)

7、r>　　 3.2.麻黃-桂枝藥對(duì)藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)
　　 3.2.1.麻黃-桂枝藥對(duì)不同配伍組急性毒性實(shí)驗(yàn)
　　 3.2.2.麻黃-桂枝藥對(duì)對(duì)酵母致熱大鼠的解熱影響
　　 3.3.3.麻黃-桂枝藥對(duì)相互作用實(shí)驗(yàn)
　　 3.3.烏頭堿和麻黃堿配伍對(duì)斑馬魚(yú)心臟毒性的初步研究
　　 4.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
　　 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（(X)±s）表示。結(jié)果比較運(yùn)用重復(fù)測(cè)量方差

8、分析，單因素方差分析（One-way ANOVA），組間多重比較方差齊時(shí)采用LSD法，不齊時(shí)用Dunnett's T3。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
　　 1.麻黃-附子藥對(duì)藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)
　　 1.1.麻黃-附子藥對(duì)不同配伍組急性毒性實(shí)驗(yàn)
　　 麻黃-附子1:0.5配伍組LD50為119.1479g/kg，麻黃-附子1:1配伍組LD50為117.4859g/kg，麻黃-附子1:2配伍

9、組LD50為115.6288g/kg，麻黃組LD50為136.3061g/kg，附子組LD50為124.4897g/kg，見(jiàn)表2-1。利用中效法處理麻黃-附子藥對(duì)配伍組急性毒性結(jié)果，運(yùn)用軟件Calcusyn處理數(shù)據(jù)。麻黃-附子1:0.5配伍組小劑量拮抗，大劑量有相加的趨勢(shì);麻黃-附子1:1配伍組小劑量有相加的趨勢(shì)，大劑量拮抗;麻黃-附子1:2配伍組明顯拮抗，在相同效應(yīng)時(shí)，CI大小的順序?yàn)?麻黃-附子1:0.5配伍組＜麻黃-附子1:1配伍

10、組＜麻黃-附子1:2配伍組，麻黃與附子三個(gè)配伍組的拮抗的強(qiáng)弱大小為:麻黃-附子1:0.5配伍組＜麻黃-附子1:1配伍組＜麻黃-附子1:2配伍組，隨著附子用量的增加，麻黃與附子配伍急性毒性的拮抗作用明顯增強(qiáng)。
　　 1.2.麻黃-附子藥對(duì)對(duì)醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響
　　 各組小鼠的扭體潛伏期經(jīng)One-way ANOVA分析組間有顯著性差異（F=6.349，P=0.000），需進(jìn)一步兩兩比較;各組小鼠的扭體次數(shù)經(jīng)One-wa

11、yANOVA分析組間有顯著性差異(F=6.282，P=0.000)，也需進(jìn)一步兩兩比較。結(jié)果:對(duì)于扭體潛伏期，吲哚美辛組、附子2組、麻黃-附子1:1配伍的高、中劑量及麻黃-附子1:0.5配伍組、全方組與模型組比較均有顯著性差異（P＜0.05），而麻黃組、附子0.5組、附子1組、麻黃-附子1:1配伍低劑量組、麻黃-附子1:2配伍組與模型組比較無(wú)顯著性差異(P＞0.05);對(duì)于扭體次數(shù)，吲哚美辛組、麻黃組、附子1組、附子2組、麻黃-附子1:

12、1配伍高劑量組、麻黃-附子1:1配伍中劑量組、麻黃-附子1:0.5配伍組、麻黃-附子1:2配伍組及全方組與模型組比較均有顯著性差異（P＜0.01），而麻黃-附子1:1配伍低劑量組與模型組比較無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。麻黃-附子1:0.5配伍組、麻黃-附子1:1配伍組和麻黃-附子1:2配伍組三個(gè)組兩兩比較均無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，三個(gè)配伍組與全方組兩兩比較也無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。故除了麻黃-附子1:1配伍低劑量組，其他各

13、給藥組均能顯著延長(zhǎng)小鼠的扭體潛伏期，減少小鼠扭體次數(shù)。
　　 1.3.麻黃-附子藥對(duì)對(duì)輻射熱致小鼠甩尾反應(yīng)的影響各組小鼠的甩尾時(shí)間經(jīng)One-way ANOVA分析組間有顯著性差異(F=7.294，P=0.000)，需進(jìn)一步兩兩比較。結(jié)果:吲哚美辛組、麻黃組、附子0.5組、附子1組、附子2組、麻黃-附子1:1配伍高、中劑量組、麻黃-附子1:0.5配伍組、麻黃-附子1:2配伍組及全方組與模型組比較均有顯著性差異（P＜0.05），而麻

14、黃-附子1:1配伍低劑量組與模型組比較無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。麻黃-附子1:0.5配伍組、麻黃-附子1:1配伍組和麻黃-附子1:2配伍組三個(gè)組兩兩比較均無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。而三個(gè)配伍組與全方組兩兩比較也無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。故除了麻黃-附子1:1配伍低劑量組，其他各給藥組均能顯著延長(zhǎng)小鼠的甩尾時(shí)間。
　　 1.4.麻黃-附子藥對(duì)相互作用實(shí)驗(yàn)
　　 麻黃-附子藥對(duì)配伍相互作用分析采用中效法，運(yùn)用軟件

15、Calcusyn對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。根據(jù)前面藥效實(shí)驗(yàn)結(jié)果，利用麻黃-附子1:1配伍組繼續(xù)研究麻黃與附子配伍的相互關(guān)系。選定麻黃、附子及麻黃-附子1:1配伍組的不同劑量進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。由Calcusyn軟件處理得出，在鎮(zhèn)痛效應(yīng)小于80％時(shí)， CI＜1，麻黃與附子配伍在鎮(zhèn)痛效應(yīng)上有協(xié)同的作用。
　　 2.麻黃-桂枝藥對(duì)藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)
　　 2.1.麻黃-桂枝藥對(duì)不同配伍組急性毒性實(shí)驗(yàn)
　　 麻黃-桂枝1:0.5配伍組LD50為13

16、8.1220g/kg，麻黃-桂枝1:1配伍組LD50為233.2471g/kg，麻黃-桂枝1:2配伍組LD50為218.5646g/kg，麻黃組LD50為139.3681g/kg，桂枝組LD50為236.6691g/kg，見(jiàn)表3-1。桂枝用量的增加，提高了LD50，上抬了95％可信區(qū)間。利用中效法處理麻黃-桂枝藥對(duì)配伍組急性毒性結(jié)果，運(yùn)用軟件Calcusyn處理數(shù)據(jù)。見(jiàn)圖1，由圖可知CI＞1，故麻黃與桂枝三個(gè)配伍組均具有拮抗作用，在相同

17、效應(yīng)時(shí)，CI大小的順序?yàn)?麻黃-桂枝1:0.5組＜麻黃-桂枝1:1配伍組＜麻黃-桂枝1:2配伍組。麻黃與桂枝三個(gè)配伍組的拮抗的強(qiáng)弱大小為:麻黃-桂枝1:0.5配伍組＜麻黃-桂枝1:1配伍組＜麻黃-桂枝1:2配伍組，隨著桂枝用量的增加，麻黃與桂枝配伍急性毒性的拮抗作用明顯增強(qiáng)。
　　 2.2.麻黃-桂枝藥對(duì)對(duì)酵母致熱大鼠的解熱影響
　　 各組大鼠給藥后不同時(shí)間體溫升高值采用重復(fù)測(cè)量和單因素方差分析，時(shí)間點(diǎn)和組別之間有交互效

18、應(yīng)（F=5.264，P=0.000）;組別之間有主效應(yīng)(F=7.333，P=0.000);各時(shí)間點(diǎn)之間有主效應(yīng)（F=69.925，P=0.000），需進(jìn)行兩兩比較。各時(shí)間點(diǎn)采用one-way ANOVA，各組之間采用的是共有時(shí)間點(diǎn)主效應(yīng)的重復(fù)測(cè)量方差分析。
　　 各時(shí)間點(diǎn)采用one-way ANOVA分析，大鼠在給藥后1h各組間無(wú)顯著差異（F=1.849，P=0.052）。大鼠在給藥后2h，各組間有顯著差異(F=6.441，P=

19、0.000)。與模型組比較，安乃近組、阿司匹林組、桂枝1組、桂枝2組、麻黃-桂枝1:1配伍高劑量組、麻黃-桂枝1:1配伍中劑量組、麻黃-桂枝1:2配伍組及麻黃湯全方組均有顯著性差異（P＜0.05），而麻黃組、桂枝0.5組、麻黃-桂枝1:1配伍低劑量組、麻黃-桂枝1:0.5配伍組與模型組比較無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。麻黃-桂枝1:0.5配伍組、麻黃-桂枝1:1配伍組、麻黃-桂枝1:2配伍組及麻黃湯全方組，經(jīng)兩兩比較均無(wú)顯著性差異(P＞

20、0.05)。大鼠在給藥后3h，各組間有顯著差異（F=12.211，P=0.000）。所有給藥組與模型組比較均有顯著性差異(P＜0.05)，麻黃-桂枝1:0.5配伍組、麻黃-桂枝1:1配伍組、麻黃-桂枝1:2配伍組及麻黃湯全方組，經(jīng)兩兩比較也均無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。故，麻黃-桂枝藥對(duì)對(duì)干酵母致大鼠發(fā)熱有解熱作用
　　 2.3.麻黃-桂枝藥對(duì)相互作用實(shí)驗(yàn)
　　 麻黃-桂枝藥對(duì)配伍相互作用分析采用中效法，運(yùn)用軟件Cal

21、cusyn對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。根據(jù)前面藥效實(shí)驗(yàn)結(jié)果，利用麻黃-桂枝1:1配伍組繼續(xù)研究麻黃與桂枝配伍的相互關(guān)系。選定麻黃、桂枝及麻黃-桂枝1:1配伍組的不同劑量進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。經(jīng)Calcusyn軟件處理得到判斷藥物相互作用關(guān)系的CI值， CI＜1，故麻黃與桂枝配伍在解熱效應(yīng)上有協(xié)同的作用。
　　 3.烏頭堿和麻黃堿配伍對(duì)斑馬魚(yú)心臟毒性的初步研究
　　 隨著烏頭堿濃度的增加，斑馬魚(yú)胚胎心臟毒性增加;同一濃度下，隨著烏頭堿作用時(shí)間的延

22、長(zhǎng)，胚胎的心臟毒性越大。且麻黃堿和烏頭堿配伍時(shí)，隨著麻黃堿濃度的增加，胚胎心臟毒性增加。
　　 結(jié)論:
　　 1.利用Calcusyn軟件處理麻黃與附子配伍的急性毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果得，麻黃與附子配伍的急性毒性主要為拮抗作用，在相同效應(yīng)時(shí)，麻黃與附子三個(gè)配伍組的拮抗的強(qiáng)弱大小為:麻黃-附子1:0.5配伍組＜麻黃-附子1:1配伍組＜麻黃-附子1:2配伍組，隨著附子用量的增加，麻黃與附子配伍急性毒性的拮抗作用明顯增強(qiáng)。
　　

23、 2.通過(guò)醋酸扭體實(shí)驗(yàn)和輻射熱甩尾實(shí)驗(yàn)證明麻黃-附子藥對(duì)有鎮(zhèn)痛作用。麻黃-附子1:0.5配伍組、麻黃-附子1:1配伍組、麻黃-附子1:2配伍組及麻黃附子細(xì)辛湯全方組，經(jīng)兩兩比較均無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。
　　 3.由Calcusyn軟件處理判斷麻黃與附子配伍的相互作用關(guān)系，在鎮(zhèn)痛效應(yīng)大于80％時(shí)， CI＜1，麻黃與附子配伍在鎮(zhèn)痛效應(yīng)上有協(xié)同的作用。
　　 4.利用Calcusyn軟件處理麻黃與桂枝的急性毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

24、，麻黃與桂枝配伍的急性毒性為拮抗作用，在相同效應(yīng)時(shí)，麻黃與桂枝三個(gè)配伍組的拮抗的強(qiáng)弱大小為:麻黃-桂枝1:0.5配伍組＜麻黃-桂枝1:1配伍組＜麻黃-桂枝1:2配伍組，隨著桂枝用量的增加，麻黃與桂枝配伍急性毒性的拮抗作用明顯增強(qiáng)。
　　 5.通過(guò)干酵母造成大鼠發(fā)熱模型，麻黃-桂枝藥對(duì)對(duì)皮下注射干酵母引起的大鼠發(fā)熱具有解熱作用。麻黃-桂枝1:0.5配伍組、麻黃-桂枝1:1配伍組、麻黃-桂枝1:2配伍組及麻黃湯全方組，經(jīng)兩兩比較均無(wú)