麻黃湯不同配伍對佐使藥有效成分及指紋圖譜的影響研究.pdf

1、中醫(yī)藥是中華民族文化的瑰寶。中藥復方又稱為方劑，方劑是在辨證審因、決定治法之后，選擇適宜的藥物，按著一定的組方原則，酌定用量、用法，妥善配伍而成的。方劑是中醫(yī)用藥的主要形式，配伍是中醫(yī)用藥的優(yōu)勢與特色所在?！八幱袀€性之特長，方有合群之妙用”，幾千年來，歷代醫(yī)家在長期的醫(yī)療實踐中總結了完整的遣藥組方理論，中藥復方在人類與疾病作斗爭的過程中，充分展示了其安全有效、防病治病的作用。我國人民長期的醫(yī)療實踐證明：中藥復方的綜合效能優(yōu)于單味藥。

2、 方劑配伍理論始于《黃帝內(nèi)經(jīng)》，經(jīng)過漢、唐、宋、元、明、清及當代研究，形成了較為系統(tǒng)的理論和方法。最有代表性的是關于藥物協(xié)同或制約的“七情和合”，“七情合和”被視為配伍理論之總綱，“君臣佐使”成為方劑組成的原則，對后世影響深遠。 方劑配伍不是藥物的簡單堆砌，它體現(xiàn)了豐富的制方學理和蘊涵著臨證組方的客觀規(guī)律。中藥配伍理論具有深奧的科學內(nèi)涵，運用現(xiàn)代科學技術、現(xiàn)代實驗手段對方劑配伍規(guī)律進行研究，具有深刻的意義：可進一步揭示方劑配

3、伍的客觀規(guī)律與科學內(nèi)涵，闡明方劑防治疾病的物質基礎與作用機理，在更廣的范圍、更深的層次展現(xiàn)中醫(yī)治療疾病的科學原理；對于創(chuàng)制優(yōu)質高效、成分清楚、作用機制明確的中藥新制劑具有重要指導作用；可促進中醫(yī)理論的發(fā)展，推動中醫(yī)藥走向世界。 對于方劑配伍規(guī)律的現(xiàn)代實驗研究，主要有兩種方法。其一是用藥理研究方法，觀察方劑配伍與藥理效應變化之間的關系，通過配伍前后藥理效應的變化探討配伍的意義；其二是用化學研究方法，觀察方劑配伍與化學成分變化間的關

4、系，從配伍前后體內(nèi)、體外物質基礎的變化探討方劑的配伍內(nèi)涵。 麻黃湯為醫(yī)圣張仲景名方，出自《傷寒論》，由麻黃、桂枝、苦杏仁、甘草組成。有發(fā)汗解表，宣肺平喘之功效，原用于太陽傷寒表實證(或稱外感風寒表實證)，現(xiàn)代主要用于上呼吸道感染、流感、急性支氣管炎、支氣管哮喘等。麻黃湯藥味不多，組方簡明，配伍精當，是歷代中醫(yī)學家倍為推崇的著名方劑，也是各版教材用以闡明方劑組成原則的首選方劑。按中醫(yī)組方理論分析，方中君臣佐使皆備：麻黃為君藥；桂枝

5、為臣藥；杏仁為佐藥；甘草為使藥，蘊含著深奧的組方原理。選用此方研究方劑配伍規(guī)律具有一定的代表意義。 對于麻黃湯全方的研究，主要集中在藥理方面。全方化學方面的研究較少。對于其由于配伍因素引起的體外化學成分的變化則只有本課題組的研究論文：課題組其他成員分別研究了配伍對君藥麻黃的有效成分麻黃堿與偽麻黃堿煎出量的影響和配伍對臣藥桂枝有效成分桂皮醛含量的影響。配伍對麻黃湯中佐藥杏仁、使藥甘草主要效應成分的影響未見文獻報道。 本文應

6、用化學研究方法，以麻黃湯為代表方，通過對麻黃湯的拆方研究，觀察配伍變化與佐、使藥化學成份變化之間的關系，探討配伍合煎后苦杏仁苷、甘草酸及甘草指紋圖譜的變化規(guī)律，從配伍前后佐藥、使藥主要成分變化的層面上闡述麻黃湯配伍規(guī)律，以期從物質基礎的角度為方劑配伍規(guī)律提供合理的解釋，并為繼續(xù)深入研究麻黃湯的組方原理打下基礎。 目的：(1)建立苦杏仁藥材中苦杏仁苷含量測定方法，選擇合適的苦杏仁藥材供本課題研究。 (2)建立麻黃湯中佐

7、藥苦杏仁的有效成分苦杏仁苷的含量測定方法，研究麻黃湯不同配伍對苦杏仁苷煎出量的影響。 (3)建立麻黃湯中使藥甘草的有效成分甘草酸的含量測定方法，研究麻黃湯不同配伍對甘草酸煎出量的影響。(4)建立甘草藥材指紋圖譜和麻黃湯中甘草指紋圖譜，研究麻黃湯不同配伍對甘草指紋圖譜主要共有指紋峰峰面積的影響。 方法：(1)采用傳統(tǒng)的中藥水煎方法，用正交設計對麻黃湯進行拆方分組，制備麻黃湯各配伍組合水煎液。水煎液樣品經(jīng)簡單的醇沉處理后制備

8、供試液。 (2)應用HPLC-ELSD法測定苦杏仁藥材中苦杏仁苷，色譜柱為Hypersil-ODS(4.0mmx250mm，5μm)；流動相為甲醇-水(30：70)，流速0.5 mL·min<'-1>；柱溫25℃；ELSD檢測器，漂移管溫度：98℃，載氣流速：3.2 L·min<'-1>： (3)應用反相高效液相色譜法測定麻黃湯各配伍組合水煎液中苦杏仁苷的含量。色譜柱為Hypersil ODS柱(4.0x250mm，

9、5μm)；流動相：甲醇-水(15：85)，流速為0.5 mL,min<'-1>；柱溫：35℃；紫外檢測器，檢測波長：210nm； (4)應用反相高效液相色譜法測定麻黃湯各配伍組合煎液中甘草酸的含量。色譜柱為Zorbax S<,B>-C<,18>柱(4.6×250mm，5μm)；流動相：乙腈-1.5％醋酸水溶液梯度洗脫，流速為0.8：ml·min<'-1>，梯度洗脫程序為：0～30min，乙腈的體積分數(shù)由23％線性增至45％，30

10、～35min，乙腈的體積分數(shù)由45％線性增至60％；柱溫：室溫；D A D檢測器，檢測波長：254nm； (5)建立甘草藥材和麻黃湯各配伍組合水煎液中甘草的HPLC指紋圖譜。選用Zorbax S<,B>-C<,18>(4.6x250mm，5μm)色譜柱；流動相：乙腈-1.2％醋酸水溶液梯度洗脫，流速為0.6 mL·min<'-1>，梯度洗脫程序為：0至70min，乙腈的體積分數(shù)由4％升至65％；分析時間70min；柱溫：室溫；D

11、 A D檢測器，檢測波長：254nm。 (6)應用SPSS 13.0統(tǒng)計分析軟件對甘草酸、苦杏仁苷測定結果進行統(tǒng)計分析。 結果：(1)建立了苦杏仁藥材中苦杏仁苷的HPLC-ELSD定量測定方法?？嘈尤受赵?.0～15.1μg 間與峰面積線性關系良好，r=0.99999；平均回收率為99.0％，RSD為2.9％(n=5)。(2)建立了麻黃湯中苦杏仁苷的HPLC定量測定方法。苦杏仁苷在101～5030ng間與峰面積線性關系良

12、好，r=0.99999；平均回收率為98.5％，RSD為1.17％(n=5)。方法簡便快速、準確可靠，復方中其他成分對測定無干擾，可用于麻黃湯中苦杏仁苷的含量測定。 測定了麻黃湯各配伍組合中苦杏仁苷的含量，麻黃、桂枝、甘草對方中苦杏仁苷含量的影響沒有顯著性差異。 (3)建立了麻黃湯中甘草酸的HPLC定量測定方法。甘草酸單銨鹽在101～5050ng間與峰面積線性關系良好，r=0.99999；平均回收率為102.5％，RSD

13、為1.81％(n=5)。方法快速、準確、靈敏，復方中其他成分對測定無干擾，可用于麻黃湯中甘草酸的含量測定。 測定了麻黃湯各配伍組合中甘草酸的含量，麻黃、桂枝、苦杏仁對方中甘草酸含量的影響具有顯著性差異。 (4)建立了甘草藥材的HPLC指紋圖譜，標定了甘草藥材38個共有指紋峰，方法穩(wěn)定、可靠、重復性好，符合國家藥品監(jiān)督管理局指紋圖譜測定的技術要求，可用于甘草藥材指紋圖譜的測定。 (5)建立了麻黃湯中甘草HPLC指紋

14、圖譜，標定了麻黃湯中甘草指紋圖譜8個主要的共有指紋峰，考察了麻黃湯各配伍組合水煎液中8個主要共有指紋峰的峰面積變化。麻黃、杏仁顯著影響甘草8個共有指紋峰的峰面積，使8個峰的峰面積顯著降低；桂枝顯著影響甘草6個共有指紋峰的峰面積，使6個峰的峰面顯著降低；全方配伍顯著影響甘草8個共有指紋峰的峰面積，使8個峰的峰面積顯著降低。 結論：麻黃湯各組方配伍對佐藥苦杏仁有效成分苦杏仁苷、對使藥甘草有效成分甘草酸及甘草指紋圖譜的影響具有一定的規(guī)

15、律性。與單味藥材相比，麻黃湯不同配伍使佐藥苦杏仁和使藥甘草的某些化學成分發(fā)生了量的變化，提示：方劑配伍后由于藥效物質基礎發(fā)生了變化，從而產(chǎn)生了不同的藥理效應和治療作用。 本課題創(chuàng)新之處： (1)首次對麻黃湯進行拆方組合后，從佐藥、使藥的有效成分苦杏仁苷、甘草酸的變化層面上闡述麻黃湯配伍規(guī)律；首次研究麻黃湯不同配伍對使藥甘草指紋圖譜發(fā)生的影響。研究結果為深入研究麻黃湯組方原理奠定了基礎，也為方劑配伍規(guī)律的現(xiàn)代研究提供一個可