ACE2-Ang(1-7)-Mas軸介導(dǎo)的胰島內(nèi)皮功能對β細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)及機(jī)制.pdf

1、目的:以血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2(ACE2)基因敲除小鼠為實(shí)驗(yàn)對象,探討ACE2-Ang(1-7)-Mas軸對長期高脂喂養(yǎng)小鼠胰島微循環(huán)及β細(xì)胞功能的影響。
　　方法:野生型C57小鼠(WT)及ACE2基因敲除(KO)小鼠均分為普通飲食(WT,KO)和高脂飲食(WH,KH)兩組,16周后,對四組小鼠行葡萄糖耐量實(shí)驗(yàn)(IPGTT)及葡萄糖刺激后胰島素釋放實(shí)驗(yàn)(IPIRT)檢測胰島功能,行胰島素耐量實(shí)驗(yàn)(IPITT)檢測外周組織胰島素敏感性

2、,以免疫組化法檢測胰島細(xì)胞內(nèi)胰島素相對含量(IRC),胰島素陽性細(xì)胞密度(ICD),以胰島內(nèi)CD31染色檢測胰島內(nèi)微血管密度(MVD),TUNEL法檢測胰島內(nèi)細(xì)胞凋亡水平。膠原酶法分離四組小鼠胰島細(xì)胞并進(jìn)行體外靜態(tài)培養(yǎng),以硝酸還原酶法檢測上清NO水平,以RT-PCR法檢測胰島組織內(nèi)eNOS,ICAM-1,VCAM-1mRNA的相對表達(dá)量。
　　結(jié)果:正常飲食條件下,與WT組相比,KO組IPGTT葡萄糖曲線下面積(AUCG)無明顯差

3、異,葡萄糖刺激后第一時相胰島素分泌呈下降趨勢,胰島組織內(nèi)胰島素相對含量(IRC)、胰島素陽性細(xì)胞核密度(ICD)略減低,胰島組織內(nèi)微血管密度(MVD)也有減少趨勢,但均未達(dá)到統(tǒng)計學(xué)差異。高脂飲食條件下,WH組較WT組IPGTT葡萄糖曲線下面積(AUCG)顯著增加(P<0.05),葡萄糖刺激后第一時相胰島素分泌減少,胰島內(nèi)胰島素相對含量(IRC)下降(P<0.05),胰島組織內(nèi)單位面積TUNEL陽性細(xì)胞數(shù)增加(P<0.05)。而與WH組相

4、比,KH組IPGTT葡萄糖曲線下面積(AUCG)進(jìn)一步上升(P<0.05),葡萄糖刺激后第一時相胰島素分泌顯著減少(P<0.05),胰島內(nèi)胰島素相對含量(IRC)、胰島組織內(nèi)微血管密度(MVD)明顯下降(P<0.05),胰島組織內(nèi)單位面積TUNEL陽性細(xì)胞數(shù)顯著增加(P<0.05)。WT組與KO組胰島內(nèi)皮細(xì)胞NO合成釋放無顯著差異,與WT組相比,WH組胰島內(nèi)皮細(xì)胞NO含量降低(P<0.05),KH組較WH組胰島內(nèi)皮細(xì)胞NO進(jìn)一步下降(P

5、<0.05)。與WT組相比,KO組胰島組織eNOSmRNA的相對表達(dá)量呈下降趨勢,但未達(dá)到統(tǒng)計學(xué)差異,ICAM-1及VCAM-1mRNA的相對表達(dá)量無明顯差異。WH組較WT組胰島組織內(nèi)ICAM-1,VCAM-1mRNA的相對表達(dá)量增加(P<0.05),eNOSmRNA的相對表達(dá)量下降(P<0.05)。KH組胰島組織內(nèi)ICAM-1(P<0.05),VCAM-1mRNA(P<0.05)的相對表達(dá)量較WH組進(jìn)一步上升,eNOSmRNA的相對表

6、達(dá)量顯著下降(P<0.05)。
　　結(jié)論:ACE2基因敲除加重長期高脂誘導(dǎo)小鼠胰島內(nèi)皮功能損傷、糖代謝異常及胰島β細(xì)胞功能障礙。
　　目的:探討Mas下調(diào)對胰島微血管內(nèi)皮細(xì)胞(MS-1)脂性凋亡的影響及其對β細(xì)胞的調(diào)節(jié)效應(yīng)。
　　方法:利用小干擾RNA(siRNA)下調(diào)MS-1細(xì)胞Mas受體的表達(dá),棕櫚酸(PA)干預(yù)24h后,分別對四組細(xì)胞(MS-1,MS-1siRNA,MS-1PA,MS-1siRNA+PA)以流式檢

7、測細(xì)胞凋亡率,以Westernblot法檢測Akt-eNOS信號通路、JNK、p38磷酸化水平及bcl-2,bax,caspase3蛋白水平的表達(dá),以RT-PCR法檢測FoxO1,p22phox,TNF-αmRNA的表達(dá),以硝酸酶還原法法檢測上清中NO水平。用siRNA及棕櫚酸(PA)干預(yù)獲得不同功能狀態(tài)的MS-1細(xì)胞,并與小鼠胰島β細(xì)胞(MIN6)共培養(yǎng),以GSIS法檢測MIN6細(xì)胞的胰島素分泌功能。
　　結(jié)果:siRNA轉(zhuǎn)染體

8、外培養(yǎng)的MS-1細(xì)胞,可以顯著降低MS-1細(xì)胞MasmRNA的表達(dá)。與MS-1組相比,MS-1siRNA組細(xì)胞凋亡率無差異;p-Akt,p-eNOS,p-JNK,p-p38,及caspase3蛋白表達(dá)水平及bax/bcl-2無差別;TNF-αmRNA的表達(dá)呈上升趨勢,但未達(dá)到統(tǒng)計學(xué)差異;FoxO1,p22phoxmRNA的表達(dá)無明顯差異;上清中NO水平呈下降趨勢,但未達(dá)到統(tǒng)計學(xué)差異。與MS-1組相比,MS-1PA及MS-1siRNA+P

9、A組細(xì)胞凋亡率顯著上升;p-Akt,p-eNOS蛋白表達(dá)下降;bax/bcl-2,p-JNK,p-p38,及caspase3蛋白表達(dá)明顯上升;TNF-α,p22phoxmRNA的表達(dá)增加;上清NO水平下降。FoxO1mRNA的表達(dá)無差異。與MS-1PA相比,MS-1siRNA+PA組細(xì)胞凋亡率進(jìn)一步增加,p-Akt,p-eNOS下降,bax/bcl-2,caspase3蛋白及TNF-αmRNA表達(dá)增加,p-p38,p-JNK蛋白表達(dá)及p

10、22phox,FoxO1mRNA的表達(dá)無差異,上清NO水平下降。MIN6-MS-1組與MIN6-MS-1siRNA組基礎(chǔ)胰島素及GSIS均無差異。MIN6-MS-1PA組和MIN6-MS-1siRNA+PA組基礎(chǔ)胰島素分泌分別較MIN6-MS-1組和MIN6-MS-1siRNA組呈下降趨勢,但均未達(dá)到統(tǒng)計學(xué)差異。MIN6-MS-1PA組與MIN6-MS-1siRNA+PA組GSIS較MIN6-MS-1組和MIN6-MS-1siRNA組均