單?；视椭久冈诖竽c癌中的作用及其作用機制的初步探討.pdf

1、目的：越來越多的流行病學(xué)調(diào)查研究表明，隨著肥胖患病率的日益提高，其所引起的社會負擔(dān)，除了已經(jīng)證實的相關(guān)疾病如高脂血癥，胰島素抵抗，糖尿病，心血管疾病等之外，還和許多腫瘤的患病率有明顯相關(guān)性。這使得肥胖的社會危害大增，甚至有研究表明其危害作用已經(jīng)超過了煙草濫用。目前，隨著流行病學(xué)研究的深入，肥胖和腫瘤的關(guān)系也進一步明確，探索肥胖與腫瘤發(fā)病機制的研究就成為目前研究的焦點。但是目前對于肥胖是如何增加腫瘤易感性或者說肥胖如何增加了致癌性還并不清

2、楚。其中脂代謝的異?？赡苁欠逝謱?dǎo)致腫瘤易感的原因之一，一項關(guān)于單?；久?MAGL)的研究為此提供了重要的證據(jù)。單酰基甘油脂肪酶，主要作用于脂肪的分解代謝，將單?；视退獠a(chǎn)生游離脂酸。研究表明MAGL在腫瘤的進展中起到重要調(diào)節(jié)作用，同時MAGL 被敲低后，腫瘤的生長明顯被抑制。根據(jù)MAGL在正常胃腸道中均有表達的特點，本實驗旨在探索MAGL在大腸癌中的表達以及其對腫瘤細胞生長的影響，同時為肥胖與大腸癌的關(guān)系尋找新的突破點。

3、　　 方法：通過免疫組化，RT-PCR法檢測MAGL在大腸癌組織中的表達，分別對其進行定性和定量分析，比較患者病理特征與MAGL表達的關(guān)系。然后，我們分別使用siRNA和JZL184分別從轉(zhuǎn)錄水平和蛋白水平抑制MAGL的表達，通過MTT 檢測細胞活性，transwell 檢測細胞侵襲性，流式細胞計數(shù)分析細胞周期，BrdU 檢測細胞增殖，末端轉(zhuǎn)移酶標記法檢測細胞凋亡等方法來評價MAGL 敲低后對腫瘤細胞生長的影響。隨后，為了進一步探索M

4、AGL在腫瘤細胞中作用的機制，我們通過RT-PCR對大腸癌細胞中部分增殖和凋亡的相關(guān)基因(cyclin D1，bcl-2，Mcl-1，cyclin E)進行篩查。最后，建立大腸癌裸鼠移植瘤模型，通過比較MAGL 敲低后與未敲低的腫瘤細胞的致瘤性，以及JZL184 對移植瘤生長的影響，來判斷MAGL 敲低后對活體腫瘤的影響。
　　 結(jié)果：發(fā)現(xiàn)MAGL的表達在腫瘤組織中明顯升高(1.87±0.62)，遠高于正常組織的(1.04±0.

5、62)(P＜0.05)，同時在患者的病理資料與MAGL表達中，我們發(fā)現(xiàn)僅有BMI指數(shù)與MAGL的表達有一定相關(guān)性(P＜0.05)，而其它并無明顯相關(guān)性(P>0.05)。進一步的研究表明，MAGL 敲低后，腫瘤細胞的生長受到明顯抑制，如LOVO細胞中，通過JZL184 作用后，細胞的增值率僅為25.1％，明顯低于對照組209.5％(P＜0.05)，凋亡率較對照組增加了7.8倍(P＜0.05)；而通過siRNA的作用后，細胞的增值率僅為28

6、.5％，亦明顯低于對照組的209.5％(P＜0.05)，凋亡率較對照組增加了6.1倍（P＜0.05)(其他結(jié)果詳見正文部分)。隨后，通過對部分細胞增殖與凋亡的相關(guān)基因的篩查，我們發(fā)現(xiàn)，bcl-2和cyclin D1的表達明顯減低，其中在轉(zhuǎn)錄水平，cyclin D1在LOVO，Caco-2和SW480中分別減低50.5％，78.8％和64.5％，而bcl-2分別減少65.4％，73.7％和51.6％ (蛋白水平減少詳見正文)。最后在移植瘤

7、模型中，我們發(fā)現(xiàn)，MAGL 敲低后腫瘤細胞Caco-2成瘤性明顯下降，1月后腫瘤體積縮小400mm 3，成瘤體積明顯小于對照組(P＜0.05)。而成瘤后給予JZL184 口服14天后，腫瘤體積也明顯縮小約300mm 3 (P＜0.05)。
　　 結(jié)論：本實驗表明MAGL 敲低后在體內(nèi)和體外均對大腸癌細胞的生長有明顯的抑制作用，對腫瘤細胞的活性，侵襲性及細胞周期都有明顯的抑制，同時，cyclin D1和bcl-2的表達也隨著MAG