miR-451在胃癌中的表達(dá)及其調(diào)控機(jī)制.pdf

1、目的:對(duì)南京地區(qū)漢族人群原發(fā)性胃癌環(huán)境危險(xiǎn)因素進(jìn)行篩選與分析，并研究漢族原發(fā)性胃癌患者外周血及組織中miR-451的表達(dá)差異及其調(diào)控機(jī)制。旨在闡述miR-451與胃癌發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后的關(guān)系，探討miR-451作為胃癌早期診斷、治療指導(dǎo)、預(yù)后預(yù)測(cè)等生物標(biāo)志物的可能性。
　　方法:1.采取1∶1配對(duì)病例對(duì)照研究方法，以585例南京市漢族人群原發(fā)性胃癌病例及選取非消化系統(tǒng)疾病、非腫瘤患者對(duì)照為研究對(duì)象。收集其環(huán)境暴露的流行病學(xué)資料及臨床

2、病理學(xué)資料。應(yīng)用條件Logistic模型分析漢族胃癌的環(huán)境危險(xiǎn)因素。2.采用實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)50例胃癌患者及其對(duì)照組血清中miR-451的表達(dá)，結(jié)合環(huán)境危險(xiǎn)因素分析miR-451的表達(dá)差異性，同時(shí)分析50例胃癌患者組織和相應(yīng)癌旁組織中miR-451的表達(dá)及其臨床意義。3.選擇高分化胃癌細(xì)胞株MKN-28、和中低分化胃癌細(xì)胞株BGC-823分別通過靶向miRNA興奮劑(mimics)和靶向miRNA抑制劑(inhibitor)轉(zhuǎn)染細(xì)胞，

3、通過流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡，探討miR-451在胃癌發(fā)生與發(fā)展中的功能，應(yīng)用預(yù)測(cè)軟件預(yù)測(cè)miR-451可能的轉(zhuǎn)錄因子和調(diào)控基因。
　　結(jié)果:1.南京市漢族人群原發(fā)性胃癌的危險(xiǎn)因素包括:消化系統(tǒng)病史(OR=1.674，95％CI∶1.251～2.242)、腫瘤家族史(OR=2.537，95％CI∶1.614～3.443)、頻繁暴飲暴食(OR=3.970，95％CI∶1.858～8.483)、頻繁三餐不定時(shí)(OR=2.077

4、，95％CI∶1.280～3.370)、新鮮水果攝入量少(OR=2.519，95％CI∶1.856～3.420)、精神壓抑(OR=1.724，95％CI∶1.856～3.420)等六項(xiàng)。胃癌患者血漿中miR-451的表達(dá)水平和對(duì)照組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，并且胃癌危險(xiǎn)因素與miR-451的表達(dá)水平無關(guān)聯(lián)。
　　2.胃癌組織和癌旁組織miR-451的相對(duì)表達(dá)量分別為0.288±0.118、0.406±0.203。其中上調(diào)26例，下調(diào)30例

5、，下調(diào)比率為53.47％(30/56)。胃癌組織中miR-451的表達(dá)水平與癌癥的分化程度、浸潤(rùn)深度和Lauren分型相關(guān)聯(lián)，且癌癥組織miR-451的表達(dá)水平明顯低于對(duì)照組中miR-451的表達(dá)水平。
　　3.根據(jù)不同分化程度癌癥組織中miR-451的表達(dá)情況不同，我們選擇了高分化度的胃癌細(xì)胞株MKN-28和中低分化程度的BGC-823細(xì)胞株作為研究對(duì)象，均通過mimics和inhibitor作用于細(xì)胞，上調(diào)和下調(diào)其miR-45

6、1的表達(dá)水平。結(jié)果發(fā)現(xiàn)高分化胃癌細(xì)胞株MKN-28細(xì)胞，其細(xì)胞形態(tài)似成纖維細(xì)胞，多偽足，對(duì)照組細(xì)胞處在G0/G1期的比例為（62.35±1.24％），mimics過表達(dá)miR-451細(xì)胞處在G0/G1期細(xì)胞比例為(69.17±2.51％)，差異在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有意義，說明過表達(dá)miR-451可明顯阻滯MKN-28細(xì)胞周期進(jìn)程，將其阻滯于G0/G1期。inhibitor抑制MKN-28細(xì)胞中miR-451表達(dá)，結(jié)果表明，對(duì)照組細(xì)胞處在G0/G1

7、期的比例為(37.95±2.37％)，inhibitor轉(zhuǎn)染細(xì)胞后其在G0/G1期細(xì)胞比例為(31.41±2.62％)，差異在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有意義。說明降低miR-451可明顯促進(jìn)MKN-28細(xì)胞周期進(jìn)程縮短，細(xì)胞分裂旺盛。中低分化胃癌細(xì)胞株BGC-823細(xì)胞，其細(xì)胞形態(tài)成橢圓形，結(jié)果表明對(duì)照組細(xì)胞處在G0/G1期的比例為(35.95％±1.7％)，mimics過表達(dá)miR-451細(xì)胞處在G0/G1期細(xì)胞比例為(56.61±3.8％)，差異在

8、統(tǒng)計(jì)學(xué)上有意義。說明過表達(dá)miR-451可明顯阻斷BGC-823細(xì)胞周期進(jìn)程，將其阻滯于G0/G1期。inhibitor抑制BGC-823細(xì)胞中miR-451表達(dá)，對(duì)照組細(xì)胞處在G0/G1期的比例為(68.80±1.37％)，inhibitor轉(zhuǎn)染細(xì)胞后其在G0/G1期細(xì)胞比例為(62.56±2.62％)，經(jīng)過統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)P＜0.05，差異在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有意義。說明降低miR-451可明顯促進(jìn)BGC-823細(xì)胞周期進(jìn)程縮短，細(xì)胞分裂旺盛。在兩

9、種胃癌細(xì)胞中結(jié)果一致，mimics高表達(dá)miR-451阻滯細(xì)胞周期的進(jìn)程，inhibitor低表達(dá)miR-451促進(jìn)miR-451的細(xì)胞周期的進(jìn)展，揭示了胃癌組織miR-451表達(dá)量較低的原因。細(xì)胞凋亡的結(jié)果顯示，兩株細(xì)胞均在轉(zhuǎn)染前后凋亡率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。并通過預(yù)測(cè)軟件預(yù)測(cè)了miR-451的相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子GATA1、SMAD3、GATA3和TCF3和可以調(diào)控的靶基因CDKN2B、SEC23IP、WDFY2、ATF2、AMZ1、PRICK