NOGO-A與NG-R在神經(jīng)元腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)及意義的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分
　　 Part I
　　 目的：通過檢測(cè)正常人腦組織和星形膠質(zhì)瘤組織中NOGO-A與NG-R(Nogo-A Receptor)的表達(dá)，探討NOGO-A、NG-R與星形膠質(zhì)瘤惡性程度的關(guān)系及其兩者之間的相關(guān)性。
　　 方法：取正常人腦組織8例和星形膠質(zhì)瘤組織37例，采用免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)各組織中NOGO-A與NG-R蛋白的表達(dá)，并用免疫印跡法(Western blot)對(duì)各組蛋白進(jìn)行定量分析；采用逆轉(zhuǎn)

2、錄酶聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)各組織中NOGO-A與NG-R mRNA水平。
　　 結(jié)果：NOGO-A與NG-R在正常腦組織中僅有少量表達(dá),在星形膠質(zhì)瘤細(xì)胞膜和細(xì)胞漿及血管內(nèi)皮細(xì)胞中有顯著表達(dá)。隨著腦膠質(zhì)瘤病理分級(jí)的增高，NOGO-A與NG-R表達(dá)明顯增強(qiáng)(P<0.05)，NOGO-A和NG-R mRNA及蛋白表達(dá)均存在正相關(guān)(r＝0.990，P<0.05；r＝0.943，P<0.05)。
　　 結(jié)論：NOGO-A

3、與NG-R在人星形膠質(zhì)瘤組織中表達(dá)強(qiáng)度與其惡性程度呈正相關(guān)，且NOGO-A與NG-R的表達(dá)之間有內(nèi)在聯(lián)系，推測(cè)NOGO-A與NG-R共同促進(jìn)星形膠質(zhì)瘤的形成與發(fā)展。
　　 Part II
　　 目的：通過檢測(cè)正常人腦組織和少突膠質(zhì)細(xì)胞瘤組織中NOGO-A與NG-R的表達(dá)，探討NOGO-A、NG-R在少突膠質(zhì)瘤形成過程中的作用。
　　 方法：取正常人腦組織8例和少突膠質(zhì)細(xì)胞瘤組織12例，采用逆轉(zhuǎn)錄酶聚合酶鏈反應(yīng)(R

4、T-PCR)、免疫組織化學(xué)染色方法檢測(cè)各組織中NOGO-A與NG-R mRNA及蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果：NOGO-A與NG-R mRNA及蛋白在正常腦組織中僅有少量表達(dá),在少突膠質(zhì)細(xì)胞瘤中高表達(dá)。
　　 結(jié)論：NOGO-A與NG-R在人少突膠質(zhì)細(xì)胞瘤的表達(dá)明顯高于正常組織，推測(cè)NOGO-A與NG-R共同促進(jìn)少突膠質(zhì)細(xì)胞瘤形成與發(fā)展。
　　 Part III
　　 目的：通過檢測(cè)正常人腦組織和神經(jīng)母細(xì)胞瘤

5、組織中NOGO-A與NG-R的表達(dá)，探討NOGO-A、NG-R與神經(jīng)母細(xì)胞瘤惡性程度的關(guān)系。
　　 方法：取正常人腦組織8例和神經(jīng)母細(xì)胞瘤組織35例，采用免疫組化染色方法檢測(cè)各組織中NOGO-A與NG-R的表達(dá)。
　　 結(jié)果：NOGO-A與NG-R在正常腦組織中有少量表達(dá),在神經(jīng)母細(xì)胞瘤中高表達(dá)。隨著神經(jīng)母細(xì)胞瘤病理級(jí)別的升高，NOGO-A和NG-R的表達(dá)逐漸增強(qiáng)。
　　 結(jié)論：人神經(jīng)母細(xì)胞瘤惡性程度越高，NOG

6、O-A與NG-R表達(dá)越強(qiáng)，推測(cè)NOGO-A與NG-R共同促進(jìn)神經(jīng)母細(xì)胞瘤形成與發(fā)展。
　　 Part IV
　　 目的：通過檢測(cè)正常人腦組織和原始神經(jīng)外胚葉腫瘤組織中NOGO-A與NG-R的表達(dá)，探討NOGO-A與NG-R在原始神經(jīng)外胚葉腫瘤形成過程中的作用。
　　 方法：取正常人腦組織8例和原始神經(jīng)外胚葉腫瘤組織15例，采用免疫組織化學(xué)染色方法檢測(cè)各組織中NOGO-A與NG-R蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果：

7、NOGO-A與NG-R在正常腦組織中有少量表達(dá),在原始神經(jīng)外胚葉腫瘤組織中有高表達(dá)。
　　 結(jié)論：NOGO-A與NG-R在人原始神經(jīng)外胚葉腫瘤中強(qiáng)表達(dá)，推測(cè)NOGO-A與NG-R在人原始神經(jīng)外胚葉腫瘤的形成與發(fā)展過程中有重要作用。
　　 第二部分
　　 Part I
　　 目的：通過檢測(cè)原始神經(jīng)元細(xì)胞生長(zhǎng)分化過程中NOGO-A與NG-R的表達(dá)，探討NOGO-A與NG-R在原始神經(jīng)元細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育過程中的作用

8、。
　　 方法：培養(yǎng)大鼠嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞系PC12細(xì)胞，用神經(jīng)生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)其分化。采用免疫熒光染色、逆轉(zhuǎn)錄酶聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)及免疫印跡法(Western blot)等方法檢測(cè)PC12細(xì)胞生長(zhǎng)分化過程中NOGO-A與NG-RmRNA及蛋白的表達(dá)及變化，并于倒置顯微鏡下隨機(jī)取20視野計(jì)數(shù)觀察細(xì)胞增值和軸突生長(zhǎng)情況。
　　 結(jié)果：未分化的PC12細(xì)胞中未檢測(cè)到NOGO-A與NG-R mRNA及蛋白表達(dá)。經(jīng)神經(jīng)生長(zhǎng)因子

9、誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞，細(xì)胞軸突不斷生長(zhǎng)，NOGO-A與NG-R mRNA及蛋白的表達(dá)逐漸增高(P<0.05)。
　　 結(jié)論：PC12細(xì)胞向交感神經(jīng)元分化的過程中NOGO-A與NG-R的表達(dá)逐漸增強(qiáng)，推測(cè)NOGO-A與NG-R在神經(jīng)元發(fā)育早期可能促進(jìn)軸突生長(zhǎng)。
　　 Part II
　　 目的：通過檢測(cè)PC12細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育過程中多巴胺的分泌及NOGO-A與NG-R的表達(dá)，探討NOGO-A與NG-R對(duì)神經(jīng)元細(xì)胞的神經(jīng)內(nèi)

10、分泌的調(diào)節(jié)。
　　 方法：培養(yǎng)大鼠嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞系PC12細(xì)胞，用神經(jīng)生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)其分化。分別取未經(jīng)誘導(dǎo)、誘導(dǎo)后第一天、第三天、第五天、第七天的細(xì)胞培養(yǎng)液，采用ELISA方法檢測(cè)各組培養(yǎng)液中多巴胺(Dopamine，DA)濃度，同時(shí)采用逆轉(zhuǎn)錄酶聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)及免疫印跡法(Western blot)等方法檢測(cè)培養(yǎng)液中NOGO-A與NG-RmRNA及蛋白的表達(dá)及變化。
　　 結(jié)果：未經(jīng)誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞培養(yǎng)液中