芹菜素、針刺對LPS誘導的SD大鼠乳腺炎的抗炎效果及其機制研究.pdf

1、芹菜素是治療乳腺炎要藥的重要成分，屬實際無毒、無遺傳毒性的黃酮類化合物，且擁有較好的抗炎作用;針刺治療疾病安全方便，該法已經廣泛應用于炎癥疾病的治療，但是芹菜素或/和針刺治療乳腺炎的效果還未見報道。本研究以SD大鼠為試驗對象，在建立乳腺炎模型的基礎上，對芹菜素或/和針刺對乳腺炎的治療效果開展體內研究;并分離培養(yǎng)SD乳腺上皮細胞，進一步研究芹菜素對LPS誘導的乳腺上皮細胞炎性損傷的保護作用及機制，以期為臨床應用芹菜素和針刺治療乳腺炎提供科

2、學的試驗依據。
　　首先建立SD大鼠乳腺炎模型。30只SD雌鼠于產后72 h隨機分為對照組和5個試驗組，每組5只，各試驗組大鼠經第四對乳頭灌注不同劑量LPS（10μg/側、20μg/側、30μg/側、40μg/側、50μg/側），對照組灌注等量PBS。灌注后24 h觀察各大鼠臨床癥狀、乳腺組織病理學變化。結果發(fā)現，試驗組大鼠第四對乳腺均可觀察到不同程度炎癥反應，且與LPS劑量呈依賴關系。結果表明，成功建立LPS誘導哺乳期SD大鼠乳

3、腺炎模型。
　　然后，利用建立的SD大鼠乳腺炎模型，探討芹菜素、針刺對乳腺炎的治療效果。將乳腺炎SD大鼠隨機分為四組:LPS刺激組（LPS組）、芹菜素治療組（Api組）、針刺治療組(Acu組)、芹菜素聯合針刺治療組（Api+Acu組），正常SD大鼠為對照組（Con組），每組5只。在LPS灌注后的24 h開始實施治療，每天一次，治療5天，最后一次治療后的24 h處死大鼠收集乳腺組織。觀察乳腺組織的病理學變化;qRT-PCR和ELIS

4、A方法檢測乳腺組織中TNF-α、IL-1β和IL-6的表達水平;western blot方法檢測MPO表達水平和TLR4/NF-κB信號通路情況。結果顯示，與LPS組相比，三個治療組的乳腺組織病變明顯減輕，MPO蛋白水平顯著降低，TNF-α、IL-1β和IL-6的mRNA和蛋白水平均顯著降低，且TLR4/NF-κB信號通路的激活被顯著抑制。以上結果說明芹菜素、針刺能通過抑制TLR4/NF-κB信號通路來治療LPS引起的SD大鼠乳腺炎。<

5、br>　　最后，分離培養(yǎng)SD大鼠乳腺上皮細胞，研究芹菜素對LPS誘導的乳腺上皮細胞炎性損傷的保護作用和機制。MTT法檢測芹菜素對大鼠乳腺上皮細胞的毒性作用，qRT-PCR和ELISA方法檢測芹菜素對大鼠乳腺上皮細胞中TNF-α、IL-1β和IL-6表達水平的影響。westernblot和IIF法檢芹菜素對SD大鼠乳腺上皮細胞中TLR4/NF-κB信號通路的影響。結果顯示，芹菜素在1～10μg/mL的濃度下無細胞毒性作用;和LPS組相比，

6、芹菜素預處理細胞能夠顯著降低TNF-α、IL-1β和IL-6的mRNA和蛋白水平;western blot結果顯示芹菜素是通過抑制乳腺上皮細胞中TLR4/NF-κB信號通路的激活而發(fā)揮其抗炎作用的，IIF法檢測結果證明，芹菜素可抑制p65的磷酸化及轉移入核。
　　本試驗對芹菜素、針刺治療乳腺炎的效果和作用機理進行了初步探索性研究，發(fā)現芹菜素、針刺能使TLR4的表達下調并對下游NF-κB信號通路的激活起到抑制作用，最終使乳腺中TNF