吉西他濱衍生物Sl-01對(duì)人乳腺癌的抑制作用研究.pdf

1、背景:癌癥嚴(yán)重威脅人類的健康，癌癥的化學(xué)治療是治療癌癥的主要手段之一，其中抗代謝類藥物的地位舉足輕重。吉西他濱是一種周期特異性抗代謝藥物，臨床主要用于非小細(xì)胞肺癌、胰腺癌、膀胱癌、乳腺癌及其他實(shí)體腫瘤的治療。但是，吉西他濱嘧啶環(huán)4位氨基易被快速代謝而失活。另外，吉西他濱的脂溶性差，并可能存在著腫瘤細(xì)胞易產(chǎn)生耐藥性等問題，這些問題限制了吉西他濱的進(jìn)一步臨床應(yīng)用。SL-01是一種新型的吉西他濱4位氨基?；苌?。我們的前期研究表明，SL-0

2、1具有穩(wěn)定性好、半衰期延長(zhǎng)，且對(duì)非小細(xì)胞肺癌和結(jié)腸癌抑制作用強(qiáng)等特點(diǎn)。本研究采用多種體內(nèi)外試驗(yàn)方法對(duì)SL-01對(duì)人乳腺癌增殖的抑制活性進(jìn)行了評(píng)價(jià)，探討了作用機(jī)制。
　　 方法:以MTT法評(píng)價(jià)了SL-01對(duì)人乳腺癌細(xì)胞MCF-7增殖的抑制作用;Hoechst33258染色法和AnnexinV/PI法分別檢測(cè)了SL-01誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞凋亡作用;碘化丙啶染色流式細(xì)胞術(shù)法檢測(cè)SL-01對(duì)MCF-7細(xì)胞周期阻滯作用;Westernbl

3、otting法檢測(cè)了SL-01對(duì)MCF-7細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白表達(dá)的影響;以裸鼠異位腫瘤模型，灌胃給藥評(píng)價(jià)SL-01對(duì)MCF-7腫瘤組織的抑制活性;Westernblotting法檢測(cè)SL-01對(duì)MCF-7腫瘤凋亡蛋白表達(dá)的影響;TUNEL染色法檢測(cè)SL-01誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞凋亡作用;Westernblotting法檢測(cè)SL-01對(duì)MCF-7腫瘤增殖細(xì)胞核抗原PCNA和核因子NF-κB表達(dá)影響;病理組織學(xué)方法檢查了SL-01對(duì)裸鼠肝臟及胃

4、腸道的毒性作用。
　　 結(jié)果:MTT結(jié)果顯示，SL-01(0.125μM-2.0μM)明顯抑制體外生長(zhǎng)的MCF-7細(xì)胞，其抑制活性呈現(xiàn)劑量依賴性關(guān)系。SL-01對(duì)MCF-7細(xì)胞72hIC50值為0.64μM。以1μM的SL-01和吉西他濱與MCF-7細(xì)胞作用72h，其抑制率分別為62.9％和58.3％。Hoechst33258染色顯示，2μMSL-01明顯誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞凋亡，細(xì)胞核染色質(zhì)濃染，固縮或集聚核膜周邊，或呈塊狀碎裂

5、改變。AnnexinV/PI染色結(jié)果顯示，0.5μM-2.0μMSL-01處理MCF-7細(xì)胞24h，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡率分別為20.4％、30.93％和34.3％。碘化丙啶染色流式檢測(cè)結(jié)果顯示，SL-01能明顯引起MCF-7細(xì)胞處于G1期阻滯，0.5μM-2.0μMSL-01處理24h后G1期細(xì)胞比例分別上升為59.3％、74.6％和77.8％。Westernblotting分析顯示，SL-01處理24h，明顯上調(diào)MCF-7細(xì)胞p53，p-A

6、TM和p21Wafl/Cip1，下調(diào)cyclinD1表達(dá)。SL-01對(duì)裸鼠體內(nèi)生長(zhǎng)的MCF-7腫瘤抑制作用非常明顯，以三天一次灌胃給予12.5、25、50μmol/kgSL-01三周后，其抑瘤率分別為10.1％、34.5％和66.5％，每三天靜脈注射25μmol/kg吉西他濱三周后抑瘤率為68.4％。TUNEL染色結(jié)果顯示，12.5、25、50μmol/kgSL-01處理三周后，MCF-7腫瘤組織的TUNEL陽(yáng)性染色水平顯著增加，顯示凋

7、亡率分別為19.4％、23.5％和33.8％。Westernblotting分析顯示，SL-01顯著上調(diào)MCF-7腫瘤中cleavedcaspase-9和cleavedPARP，明顯降低easpase-3和caspase-9蛋白表達(dá)水平，同時(shí)上調(diào)MCF-7腫瘤Bax與Bcl-2比值。此外，SL-01還顯著下調(diào)PCNA和NF-κB的表達(dá)。病理組織學(xué)檢查未發(fā)現(xiàn)SL-01引起肝臟和胃腸道明顯病變。
　　 結(jié)論:SL-01對(duì)體內(nèi)外生長(zhǎng)的