CXCR4-CXCL12軸與早期宮頸癌（FIGO ⅠB1～ⅡA）淋巴結轉移相關性研究.pdf

1、第一部分 CXCR4/CXCL12在宮頸癌細胞的表達及與淋巴結轉移及宮頸慢性炎癥相關性。 目的：淋巴結轉移與否是影響宮頸癌預后的重要因素之一，本研究旨在探討CXCR4、CXCL12蛋白在宮頸癌細胞過表達相關性、與宮頸癌淋巴結轉移及宮頸間質慢性炎癥浸潤的相關性。 方法：應用免疫組織化學法檢測35例宮頸腺癌、89例宮頸鱗癌組織標本癌細胞及20例正常宮頸組織中CXCR4、CXCL12蛋白的表達，所有病例根據淋巴結有無轉移分組。

2、淋巴結陽性組28例，淋巴結陰性組96例。90﹪以上腫瘤細胞強著色定義為過表達。采用Fisher’s精確概率檢驗法、卡方檢驗、秩和檢驗及PearSon相關檢驗分析結果。 結果： ①宮頸癌細胞CXCR4表達與淋巴結轉移89例宮頸鱗癌中均有不同數量腫瘤細胞表達不同強度的CxCR4，陽性表達率100﹪(89/89)，過表達率44.94﹪(40/89)。胞膜、胞漿著色，未見胞核著色。 ②宮頸癌細胞CXCL12表達與淋巴結轉

3、移及分期CXCL12在宮頸鱗癌細胞胞膜和胞漿表達，陽性表達率100﹪(89/89)，過表達率23.60﹪(21/89)。淋巴結轉移組CXCL12過表達率(20.00﹪，4/20)低于淋巴結無轉移組(24.64﹪，17/69)，p=0.460。 ③宮頸癌細胞CXCR4/CxCL12表達的相關性在宮頸鱗癌，臨床ⅠB期且無淋巴結轉移組，CXCR4表達得分與CXCL12表達得分間呈正相關(P=0.029)。所有病例合并后分析，CXCR4

4、與CXCL12表達具相關性(P=0.002)。 結論: 1. 宮頸腺癌細胞過表達CXCR4與盆腔淋巴結轉移相關，與宮頸鱗癌盆腔淋巴結轉移不相關。 2. 宮頸癌細胞過表達CXCL12與宮頸腺癌、鱗癌淋巴結轉移均無關卻隨宮頸腺癌臨床分期升高而升高。 3. CXCR4-CXCL12在宮頸鱗癌及早期腺癌中的表達呈正相關。 4． CXCL12在宮頸原發(fā)灶的表達與鱗癌宮頸間質炎性浸潤不相關，卻與腺癌宮頸間質淋

5、巴細胞浸潤相關。 第二部分宮頸癌細胞CxCL12、CXCR4表達與宮頸癌細胞增殖及血清SCC水平相關性研究。 目的：探討CXCL12/CXCR4與宮頸癌細胞增殖及宮頸癌病人血清SCC水平相關性。 方法：應用免疫組織化學法檢測70例宮頸癌組織標本中癌細胞CXCR4、CXCLl2蛋白及Ki-67抗原的表達。應用放射免疫法檢測病人血清SCC水平。 結果： ① CXCR4、CXCL12、Ki-67在宮頸癌

6、組織中的表達及宮頸癌病人血清SCC水平70例病例中均有不同數量腫瘤細胞表達不同強度的CXCR4、CXCL12，陽性表達率分別為97.14﹪(68/70)、98.57﹪(69/70)。均為胞膜、胞漿著色，未見胞核著色。 Ki-67指數在70例宮頸癌組織中高低不一，26.41±24.945(mean±SD)(范圍：2～95)，胞核染色。 血清SCC水平在70例病例高低不一，1.354±2.95643(mean+SD)(范圍：0.00

7、ng/ml～23.60ng/ml)，陽性率為87.14﹪(61/70)。 ②宮頸癌細胞CXCR4、CXCL12表達與Ki-67指數及血清SCC水平相關性Ki-67指數與宮頸癌細胞CXCL12表達呈正相關，卻與CXCR4表達無相關性。宮頸癌細胞CXCL12、CXCR4表達與病人血清SCC水平均無相關性。 結論: 1.宮頸癌細胞自分泌CXCL12可促進宮頸癌細胞增殖。 2.宮頸癌細胞表達CXCR4與宮頸癌細胞

8、增殖程度不相關。 第三部分 CXCR4/CXCL12相互作用對宮頸癌細胞株運動、粘附、侵襲能力的影響。 目的：檢測CXCR4、CXCL12蛋白在宮頸腺癌、鱗癌細胞株的表達。觀察CXCR4-CXCL12互相作用對體外培養(yǎng)的宮頸腺癌、鱗癌細胞運動、粘附、侵襲能力的影響。初步探討CXCR4-CXCL12相互作用在宮頸癌轉移發(fā)生中的作用及CXCR4抑制劑抑制宮頸癌細胞轉移的可能性，為CXCR4抑制劑用于臨床提供實驗基礎。

9、 方法：①細胞免疫化學法、Western blot法及流式細胞儀檢測CXCR4/CXCL12在宮頸癌細胞HeLa、SiHa細胞的表達情況。 ②侵襲性實驗、劃痕實驗、粘附性實驗分別檢測CXCR4/CXCL12相互作用對HeLa、SiHa細胞侵襲能力、運動能力、粘附能力的影響。 ③侵襲抑制性實驗檢測CXCR4抑制劑對HeLa、SiHa侵襲能力的影響。 結果： ①HeLa，SiHa細胞均表達內源性CXCR4、C

10、XCL12。但兩者在HeLa細胞的表達均強于SiHa細胞。 ② CXCL12呈劑量依賴性誘導HeLa、SiHa細胞穿過仿人基底膜。100ng/ml～200ng/ml濃度時誘導效果最佳。 ③在相同濃度CXCL12(200ng/ml)誘導下，HeLa、SiHa細胞經CXCR4生物抑制劑MAB170(20ug/ml)處理后，與對照組(MAB170=0ul/ml)相比，穿透仿人基底膜細胞數明顯減少(p=0.000)。 ④

11、HeLa、SiHa細胞經CXCL12(200ng/ml)處理后，HeLa細胞一周內爬滿六孔板，SiHa細胞四天爬滿六孔板。對照組(0ng/ml)所用時間均長于處理組。MAB170(20ug/ml)與CXCL12(200ng/ml)共同作用于細胞后，與前兩組相比，細胞爬行速度明顯減慢。 ⑤HeLa細胞無處理組與CXCL12(200ng/ml)處理組之間(p=0.038)；CXCL12(200ng/ml)處理組與CXCL12(200

12、ng/ml)與MAB170(20ug/ml)共同處理組之間(p=0.015)，HeLa細胞粘附能力差異均具統(tǒng)計學意義；但無處理組與CXCL12及MAB170共同處理組間HeLa細胞粘附能力差異無統(tǒng)計學意義(p=0.144)。SiHa細胞株無處理組與CXCLl2(200ng/ml)處理組之間(p=0.007)，無處理組與CXCL12(200ng/ml)及MAB170(20ug/ml)共同處理組間(p=0.024)，SiHa細胞株粘附能力差

13、異具統(tǒng)計學意義；但CXCL12處理組與CXCL12與MAB170共同處理組之間(p=0.078)，SiHa細胞粘附能力差異無統(tǒng)計學意義。 結論： 1.宮頸腺癌、鱗癌細胞株均表達內源性CXCR4及CXCL12。但兩者在HeLa細胞株的表達均強于SiHa細胞株。 2.CXCL12可增強HeLa、SiHa細胞移動、侵襲、粘附能力。 3.CXCR4抑制劑可有效抑制CXCL12增強的HeLa、SiHa細胞移動、侵襲