MC1568對腦出血大鼠的神經(jīng)保護作用及其機制的研究.pdf

1、第一部分大鼠腦出血過程中HDAC各亞型的表達變化
　　目的：觀察腦出血大鼠腦組織中各種 HDAC亞型的表達變化，從而明確參與腦出血損傷的病理過程的HDAC亞型
　　方法：采用Ⅳ型細菌性膠原酶定向注射誘導(dǎo)大鼠大腦基底節(jié)出血模型，通過 HE染色進行病理形態(tài)學觀察，然后通過實時熒光定量PCR技術(shù)分別檢測腦出血后3、6、12、24、48小時及假手術(shù)組大鼠腦組織內(nèi)各種HDACmRNA水平變化，免疫蛋白印跡技術(shù)檢測HDAC蛋白水平變化，

2、免疫熒光技術(shù)對其進行細胞類型鑒別及亞細胞定位
　　結(jié)果： HE染色可見大鼠右側(cè)尾狀核區(qū)形成了類圓形血腫，血腫內(nèi)組織疏松，可見大量空泡，神經(jīng)細胞明顯減少，血腫周圍區(qū)域可見較多紅細胞和炎性細胞浸潤；假手術(shù)組和腦出血組大鼠腦組織內(nèi)11類亞型的HDAC均有表達，且與假手術(shù)組相比，腦出血組HDAC4、HDAC5和HDAC7mRNA表達水平增高，而HDAC1、HDAC2、HDAC3、HDAC6、HDAC8、HDAC9、HDAC10、HDAC1

3、1mRNA表達水平無明顯差異；腦出血組 HDAC4和HDAC5蛋白水平較假手術(shù)組明顯升高，而兩組HDAC7蛋白表達量則無明顯變化；經(jīng)免疫熒光雙標發(fā)現(xiàn)HDAC4和HDAC5均主要于神經(jīng)元表達，且同時存在于細胞核和細胞漿。
　　結(jié)論：細菌性膠原酶定向注射成功建立穩(wěn)定的大鼠右側(cè)紋狀體出血模型；HDAC1-11在正常腦組織和出血腦組織中均有表達，而腦出血僅誘導(dǎo)了 HDAC4和HDAC5在 mRNA和蛋白水平表達增多，且表達HDAC4和HD

4、AC5的細胞類型主要是神經(jīng)元，表明二者很可能在腦出血性損傷形成過程中有著重要的調(diào)控作用。
　　第二部分 MC1568對腦出血大鼠的神經(jīng)保護作用
　　目的：觀察MC1568對腦出血損傷大鼠的神經(jīng)保護作用
　　方法：Ⅳ型細菌性膠原酶成功誘導(dǎo)大鼠腦出血后，將其分為MC1568組和生理鹽水組，分別給予MC1568和生理鹽水（25mg/kg，每天兩次，腹腔注射）三天，于腦出血后1天、3天、7天、14天和28天分別對其進行神經(jīng)功能

5、評分和頭顱磁共振掃描，第3天分別通過干濕重法和TUNEL法評估大鼠腦組織水含量和神經(jīng)細胞凋亡情況。
　　結(jié)果：與生理鹽水組比較，MC1568組大鼠改良的神經(jīng)功能嚴重程度評分在腦出血后7、14和28天均明顯降低,而第1和3天的評分則無明顯差異；血腫體積在第1天兩組無差異，第3天MC1568組血腫體積明顯縮小；兩組的腦組織水含量無明顯差異；腦出血后第28天MC1568組腦組織損失百分比較生理鹽水組??；MC1568組大鼠血腫周圍區(qū)域TU

6、NEL陽性細胞數(shù)較生理鹽水組減少。
　　結(jié)論： MC1568抑制了腦出血大鼠血腫擴大，減少神經(jīng)細胞凋亡，減少了出血后腦組織的損失，從而減輕了神經(jīng)功能損傷，表明 MC1568對腦出血誘導(dǎo)的原發(fā)性和繼發(fā)性損傷具有明顯的保護作用。
　　第三部分 MC1568對腦出血大鼠的神經(jīng)保護作用的機制
　　目的：在分子水平上初步探討MC1568對腦出血的保護作用的機制
　　方法：細菌性膠原酶成功誘導(dǎo)大鼠腦出血模型，分別給予 MC1

7、568和生理鹽水，通過實時熒光定量PCR檢測腦組織內(nèi)凋亡因子caspase-3和bcl-2、炎癥因子MMP-9、TNF-α、IL-1β的 mRNA水平，免疫蛋白印跡技術(shù)檢測 caspase-3、bcl-2、MMP-9、TNF-α、IL-1β蛋白水平，TUNEL法檢測腦組織內(nèi)細胞凋亡情況。
　　結(jié)果：與生理鹽水組比較，MC1568組大鼠腦組織內(nèi)caspase-3、MMP-9、TNF-α、IL-1β的mRNA水平明顯降低，bcl-2m