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文檔簡(jiǎn)介
1、背景和目的: 機(jī)體的免疫反應(yīng)在幽門螺桿菌(Helicobacter pylori,H.pylori)致病和H。pylori疫苗的免疫保護(hù)中均起重要作用,因此闡明Hpylori感染的免疫致病機(jī)制和且pylori疫苗的免疫保護(hù)機(jī)制,對(duì)于H.pylori相關(guān)性疾病的防治具有十分重要的意義。Th免疫反應(yīng)在H.pylori感染的免疫致病及疫苗的免疫保護(hù)中均起著重要作用。但是H.pylori感染和H.pylori疫苗接種究竟通過(guò)何種機(jī)制影響
2、Th反應(yīng),目前尚不清楚。T細(xì)胞免疫球蛋白黏蛋白結(jié)構(gòu)域相關(guān)分子(T-cell immunoglobulin and mucin-domain-contairung molecule,Tim)是新近發(fā)現(xiàn)在T細(xì)胞表面的跨膜蛋白家族,它對(duì)CD4+T細(xì)胞分化成Th1和Th2細(xì)胞,調(diào)控效應(yīng)T細(xì)胞(Th1和Th2)的應(yīng)答起著重要作用,Tim-1和Tim-3是Tim家族中的兩個(gè)重要成員,它們分別在分化成熟的Th2和Th1細(xì)胞表達(dá),并參與Th免疫反應(yīng)的調(diào)
3、控。H.pylori感染及疫苗接種對(duì)Tim的影響目前尚不清楚,為此本研究在體內(nèi)外觀察了H.pylori感染及疫苗接種后Tim-1及Tim-3的表達(dá),及其與Th1和Th2免疫反應(yīng)的關(guān)系,旨在初步探討H.pylori感染和H.pylori疫苗接種影響Th反應(yīng)的機(jī)制,為后續(xù)以Tim-1和Tim-3為靶點(diǎn)防治H.pylori感染和H.pylori相關(guān)性疾病提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法: (1)H.pylori與小鼠脾淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)
4、:以不同濃度的SS1 H.pylori活菌(0CFU/ml、0.50×107CFU/ml、1.00×107CFU/ml、2.00×107CFU/ml、4.00×107CFU/ml)與原代分離的BALB/c小鼠脾淋巴細(xì)胞共培養(yǎng),分別在3h、6h、12h和24h點(diǎn)收集細(xì)胞。 (2)小鼠H.pylori感染模型建立和根除治療:6-8周齡的清潔級(jí)的BALB/c小鼠,給予含1.0×109/ml的SS1 H.pylori活菌液,0.5ml/
5、只,灌胃,隔日一次,共5次。建立動(dòng)物模型后,隨機(jī)分為2組:H.pylori感染組:僅給予藥物賦形劑5%阿拉伯樹膠溶液;H.pylori根除組:給予洛賽克(質(zhì)子泵抑制劑,PPI)0.06 mg/次/只,羥氨芐青霉素2.9mg/次/只,克拉霉素1.5 mg/次/只和5%阿拉伯樹膠溶液。分別給予上述藥物每日2次灌胃,共2周。另設(shè)一正常對(duì)照組不給予H.pylori和任何藥物。停藥后4周,處死小鼠,取標(biāo)本待測(cè)。 (3)H.pylori疫苗
6、免疫保護(hù)接種:6~8周齡的清潔級(jí)BALB/c小鼠隨機(jī)分為以下3組:正常對(duì)照組:不接種疫苗也不給予H.pylori攻擊;疫苗對(duì)照組:PBS溶液;疫苗免疫組:H.pylori抗原+殼聚糖顆粒+CT組,后二組于第0、7、14、21天灌胃各免疫1次,末次免疫后4周給予1.0×109CFU/ml的SSl H.pylori菌液0.5ml/只進(jìn)行攻擊,隔日一次,共2次。4周后,處死小鼠,取標(biāo)本待測(cè)。 (4)各項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè):①胃黏膜內(nèi)H.pylo
7、ri的檢測(cè):采用改良Giemsa染色和H.pylori定量培養(yǎng);②血清抗H.pylori IgG1、IgG2a和胃黏膜內(nèi)IL-2、IL-12、IFN-γ、IL-4、IL-10含量的檢測(cè):采用間接ELISA法和雙抗體夾心ELISA法;③脾和淋巴細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)Tim-1和Tim-3 mRNA檢測(cè):采用RT-PCR方法。④Tim-3陽(yáng)性細(xì)胞檢測(cè):采用流式細(xì)胞術(shù)。 結(jié)論: 1.H.pylori在體外可下調(diào)小鼠淋巴細(xì)胞Tim-1的表
8、達(dá),上調(diào)Tim-3的表達(dá),并降低Tim-1/Tim-3比值,提示它可抑制T淋巴細(xì)胞向Th2細(xì)胞分化,促進(jìn)T淋巴細(xì)胞向Th1細(xì)胞分化,誘導(dǎo)Th1優(yōu)勢(shì)的免疫反應(yīng)。 2.在體內(nèi)H.pylori感染能下調(diào)小鼠脾臟內(nèi)Tim-1的表達(dá),上調(diào)Tim-3的表達(dá),使Tim-1/Tim-3比值下降,而H.pylori根除后Tim-1表達(dá)回升,Tim-3表達(dá)下降,Tim-1/Tim-3比值上升,提示H.pylori感染可誘導(dǎo)Th1優(yōu)勢(shì)的免疫反應(yīng),而H
9、.pylori根除后可逆轉(zhuǎn)H.pylori感染所致的Th1優(yōu)勢(shì)的免疫反應(yīng)。 3.H.pylori疫苗接種后可上調(diào)小鼠脾臟Tim-1和Tim-3 mRNA的表達(dá),使Tim-1/Tim-3比值上升,提示H.pylori疫苗接種可誘導(dǎo)Th1和Th2混合免疫反應(yīng),并可逆轉(zhuǎn)H.pylori感染所致的Th2反應(yīng)抑制,恢復(fù)Th1/Th2免疫反應(yīng)的平衡。 4.在H.pylori感染和疫苗接種各組Tim-1的表達(dá)與反映Th2免疫反應(yīng)的抗H
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