放射性淚腺損傷動物模型的建立、病理生理機(jī)制研究及Gadd45α在其損傷修復(fù)中作用的探討.pdf

1、目的:通過不同放射劑量對小鼠眼眶進(jìn)行局部外放射研究，建立放射性淚腺損傷動物模型并探討其相應(yīng)的病理生理機(jī)制。進(jìn)一步探討Gadd45α是否在放射引起的淚腺損傷修復(fù)中起到作用，及其相關(guān)的信號通路。
　　方法:第一部分:8周齡雌性C57BL/6小鼠，50只，按照隨機(jī)原則分成五組:12、15、18、21Gy照射劑量組及正常對照組。小鼠全身麻醉，行眼眶外X線局部照射。分別于照射前及照射后3天、7天和30天行淚液分泌試驗、淚腺閃爍掃描檢測，并取

2、淚腺組織，行組織學(xué)及超微結(jié)構(gòu)檢測。第二部分:8周齡健康的雌性C57BL/6小鼠，10只，按照隨機(jī)原則分成兩組。對照組不進(jìn)行照射。實驗組小鼠在全身麻醉下用15Gy的劑量進(jìn)行照射，照射后3天摘除左側(cè)淚腺用于定量PCR、免疫組化、劃痕試驗、細(xì)胞增殖試驗、western blot等觀察Gadd45α在放射后小鼠淚腺組織中的表達(dá)水平。7天后摘除另一側(cè)淚腺，與左側(cè)淚腺進(jìn)行同樣試驗步驟。
　　結(jié)果:與照射前相比，當(dāng)照射總量為15Gy時，淚腺中腺

3、泡細(xì)胞數(shù)量減少，和淚腺分泌相關(guān)的α-SMA、腺體特異水通道蛋白（AQP-5）表達(dá)減少，Tenascin-C、CK8表達(dá)增加，且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。在透射電鏡下觀察，凋亡小體增多，染色質(zhì)邊集，細(xì)胞核濃縮，基質(zhì)溶解呈空泡狀，可見巨噬細(xì)胞吞噬現(xiàn)象。分泌顆粒減少，基底膜增厚，可見少量炎癥細(xì)胞。淚腺閃爍掃描、Schirmer I test檢測淚液分泌功能降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(照射后3天:t=4.491，P=0.011;照射后7天:t=8.777

4、，P=0.001;照射后30天:t=4.474，P=0.011)。無明顯眼內(nèi)并發(fā)癥（白內(nèi)障、放射性視網(wǎng)膜病變等）。放射劑量增加時，淚腺組織的炎癥反應(yīng)加重，組織凋亡明顯，淚腺已喪失淚液分泌功能。以12Gy放射劑量照射時，淚液分泌功能下降不明顯，與照射前相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。在照射后淚腺組織中Gadd45α（Growth-arrest and DNA damage-inducible45α）表達(dá)上調(diào)。此外，過度表達(dá)的Gadd45α可能通過