p27KIP1對(duì)犬頸動(dòng)脈支架置入后支架內(nèi)再狹窄影響及Rho激酶抑制劑法舒地爾的干預(yù)研究.pdf

1、目的：1、觀察比格犬通過(guò)球囊損傷結(jié)合氮?dú)飧稍锉雀袢i動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞形成頸動(dòng)脈粥樣硬化狹窄模型;2、支架植入術(shù)后P27(KIP1)對(duì)再狹窄過(guò)程中新生內(nèi)膜形成的作用,以及Rho激酶抑制劑法舒地爾的干預(yù)研究。方法:18只雄性比格犬,按照隨機(jī)的原則分為假手術(shù)組(A組, n=4)、動(dòng)脈粥樣硬化狹窄造模組(E組,n=14,其中包含2只造模備用)。假手術(shù)組(A組)在分離出雙側(cè)頸總動(dòng)脈后,不進(jìn)行任何處理,然后縫合傷口,動(dòng)脈粥樣硬化狹窄造模組雙側(cè)頸總動(dòng)脈均

2、進(jìn)行氮?dú)饧忧蚰覔p傷內(nèi)皮細(xì)胞,造模后均給予高脂飲食2個(gè)月,造模2個(gè)月后在進(jìn)行 DSA檢查,并將 E組隨機(jī)分為動(dòng)脈粥樣硬化狹窄組(B組),單純支架組(C組),支架加藥物治療組(D)。在 C、D組比格犬右側(cè)頸總動(dòng)脈中植入支架,之后普通飲食喂養(yǎng),在造模前、支架植入前3天和置入后7天,2個(gè)月分別行頸部血管彩超檢查,觀察頸總動(dòng)脈斑塊形成及狹窄情況,支架置入后2個(gè)月時(shí)再次行 DSA檢查,了解頸部支架置入血管血流及有無(wú)充盈缺損情況。隨后取比格犬雙側(cè)頸總

3、動(dòng)脈,將右側(cè)頸總動(dòng)脈用于病理形態(tài)學(xué)檢測(cè),以免疫組化法檢測(cè) P27(KIP1)、增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)、 a-平滑肌肌動(dòng)蛋白。結(jié)果:1、在造模過(guò)程中有2只比格犬死亡,立即補(bǔ)上,在最后取血管標(biāo)本的過(guò)程中,假手術(shù)組中有一只比格犬死亡,死亡原因可能均為麻醉意外所致,其余12只比格犬在取出雙側(cè)頸總動(dòng)脈后,仍存活良好。
　　2、 HE染色示 A組(假手術(shù)組)無(wú)內(nèi)膜增生; B組(動(dòng)脈粥樣硬化狹窄組)內(nèi)膜增生明顯,可見(jiàn)大量粥樣硬化斑塊、膽固醇

4、結(jié)晶以及新生內(nèi)膜;C組(單純裸支架組)可看到支架內(nèi)內(nèi)膜膜增生明顯,支架周圍可見(jiàn)炎性細(xì)胞聚集;D(支架加藥物治療組),可見(jiàn)不同程度的新生內(nèi)膜增生,支架周圍炎癥細(xì)胞聚集比較離散。
　　3、 P27(KIP1)免疫組化結(jié)果示A組(假手術(shù)組)中膜上可見(jiàn)較多棕黃色陽(yáng)性顆粒,B組(動(dòng)脈粥樣硬化狹窄組)、C組(單純支架組)中膜和內(nèi)膜均可以看到棕黃色陽(yáng)性顆粒表達(dá)較少;D(支架加藥物治療組)中層棕黃色陽(yáng)性顆粒表達(dá)更多、染色更深,內(nèi)膜部位表達(dá)較淺,

5、P27(KIP1)免疫組化光密度值在 A、B、C、D組相互比較中, A組最高,D組高于C組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P=0.000(0.05)。
　　4、a-平滑肌肌動(dòng)蛋白免疫組織化學(xué)代表的增值平滑肌細(xì)胞的結(jié)果,其中A組(假手術(shù)組)表現(xiàn)為血管的中膜的平滑肌的細(xì)胞呈整齊的排列,有少數(shù)出現(xiàn)紊亂的表現(xiàn),無(wú)新生內(nèi)膜形成,表明經(jīng)過(guò)2個(gè)月的高脂飲食喂養(yǎng)后,平滑肌細(xì)胞出現(xiàn)輕微增殖、遷移的表現(xiàn),但尚未形成新生內(nèi)膜。B組(動(dòng)脈粥樣硬化狹窄組)、C組(單

6、純裸支架組)、D組(支架+藥物治療組)中膜平滑肌細(xì)胞的排列較紊亂。法舒地爾能夠顯著抑制支架置入后平滑肌增生,進(jìn)而影響新生內(nèi)膜形成。
　　5、增殖細(xì)胞核抗原免疫組化結(jié)果示 A組(假手術(shù)組)見(jiàn)少量弱陽(yáng)性棕黃色顆粒表達(dá),B(動(dòng)脈粥樣硬化狹窄組)、C(單純支架組)組中增殖細(xì)胞核抗原陽(yáng)性表達(dá)明顯多于 A組(假手術(shù)組),且主要位于中膜和內(nèi)膜中,C組(動(dòng)脈粥樣硬化狹窄組)在支架周圍增殖細(xì)胞核抗原陽(yáng)性顆粒較多,增殖細(xì)胞核抗原免疫組化光密度值在 A

7、(假手術(shù)組)、B(動(dòng)脈粥樣硬化狹窄組)、C(單純支架組)、D組(支架+藥物治療組)組比較中,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P=0.000(0.05,表明支架長(zhǎng)期炎性刺激使細(xì)胞增殖增多。
　　6、各指標(biāo)之間相關(guān)性分析為了進(jìn)一步了解頸動(dòng)脈支架植入后內(nèi)膜增厚的原因,采用Pearson相關(guān)系數(shù)對(duì)各指標(biāo)的相關(guān)性進(jìn)行分析,P27(KIP1)與 a-平滑肌肌動(dòng)蛋白、增殖細(xì)胞核抗原呈正相關(guān),并且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：1.采用氮?dú)飧稍锓ńY(jié)合球囊損傷內(nèi)

8、皮細(xì)胞,再飼以高脂飲食,能較好的建立比格犬頸總動(dòng)脈粥樣硬化狹窄模型。
　　2.比格犬頸動(dòng)脈經(jīng)過(guò)球囊損傷和氮?dú)鈸p傷內(nèi)皮細(xì)胞后增生的血管中層中PCNA和a-平滑肌肌動(dòng)蛋白表達(dá)明顯增加, P27(KIP1)表達(dá)減少,表明P27(KIP1)減少可能通過(guò)促進(jìn)平滑肌細(xì)胞的遷移和增殖,。
　　3、法舒地爾能夠顯著抑制支架置入后平滑肌增生內(nèi) P27(KIP1)表達(dá)下調(diào),進(jìn)而影響新生內(nèi)膜形成。
　　結(jié)論：1、采用氮?dú)飧稍锓ńY(jié)合球囊損傷內(nèi)

9、皮細(xì)胞,再飼以高脂飲食,能較好的建立比格犬頸總動(dòng)脈粥樣硬化狹窄模型。
　　2、比格犬頸動(dòng)脈經(jīng)過(guò)球囊損傷和氮?dú)鈸p傷后內(nèi)皮細(xì)胞增生的血管中層中PCNA和a-平滑肌肌動(dòng)蛋白表達(dá)明顯增加, P27(KIP1)表達(dá)減少,表明P27(KIP1)減少可能通過(guò)促進(jìn)平滑肌細(xì)胞的遷移和增殖。
　　3、比格犬頸動(dòng)脈支架置入后內(nèi)皮細(xì)胞增生明顯,血管壁中層中PCNA和a-平滑肌肌動(dòng)蛋白表達(dá)明顯增加，法舒地爾組支架組新生內(nèi)膜形成明顯減弱，說(shuō)明法舒地爾能