頸源性頭頸痛的神經(jīng)機(jī)制研究.pdf

1、第一部分頸部交感一感覺神經(jīng)藕聯(lián)的形態(tài)學(xué)觀察及其在頸源性疼痛中的作用機(jī)制研究
　　 實(shí)驗(yàn)一
　　 目的：頭頸痛臨床上很常見，明確分布于頸部組織結(jié)構(gòu)包括硬膜、后縱韌帶、小關(guān)節(jié)囊和椎動(dòng)脈的神經(jīng)支配和神經(jīng)遞質(zhì)的化學(xué)狀況，對于預(yù)防和治療頭頸痛有重要的意義。
　　 方法：SD大鼠24 只，隨機(jī)分為A、B 二組，每組12 只，A組行頸交感神經(jīng)切除術(shù)，B組假手術(shù)，兩組大鼠存活一天后，再次麻醉、灌注，取C3-C5 脊髓段硬膜包括D

2、RG、椎管前后壁軟組織層包括后縱韌帶、小關(guān)節(jié)囊、椎動(dòng)脈等標(biāo)本，采用二步Envision 法進(jìn)行SP(P 物質(zhì))和TH(酪氨酸羥化酶)免疫組化染色，光鏡下觀察SP 免疫反應(yīng)(SP-IR)纖維和TH 免疫反應(yīng)(TH-IR)纖維，測量各區(qū)免疫反應(yīng)纖維陽性區(qū)域面積。
　　 結(jié)果：硬膜、后縱韌帶、小關(guān)節(jié)囊和椎動(dòng)脈壁均有SP-IR和TH-IR 陽性纖維分布，其中硬膜陽性纖維主要分布于根袖區(qū)和腹側(cè)區(qū)，后縱韌帶陽性纖維主要分布于椎間部，椎動(dòng)脈壁

3、外膜外、外膜層和中膜層以TH-IR 纖維為主，頸交感神經(jīng)切除后各結(jié)構(gòu)TH-IR 纖維均顯著減少(P＜0.01)。
　　 結(jié)論：頸椎周圍的組織結(jié)構(gòu)中有肽類遞質(zhì)SP和經(jīng)典遞質(zhì)NE 共存，表明這些結(jié)構(gòu)和頸源性疼痛癥狀有關(guān)，交感神經(jīng)系統(tǒng)可能在周圍神經(jīng)初級(jí)感覺信息的調(diào)制中有重要的意義；硬膜根袖區(qū)SP 反應(yīng)纖維密度較高，如受到刺激，可能較早出現(xiàn)向上肢的放散性疼痛；椎動(dòng)脈表面及及中膜肌層有致密的交感神經(jīng)分布,如有壓迫、炎癥等因素,可能引起椎動(dòng)

4、脈的痙攣并出現(xiàn)椎基底動(dòng)脈系統(tǒng)血流障礙(VBI)。
　　 實(shí)驗(yàn)二
　　 目的：探討頸部脊神經(jīng)節(jié)(DRG)和交感神經(jīng)節(jié)(SG)內(nèi)腎上腺素(NA)能神經(jīng)和肽能神經(jīng)的分布，脊神經(jīng)節(jié)內(nèi)NA 能纖維的起源以及脊神經(jīng)節(jié)和交感神經(jīng)節(jié)在疼痛調(diào)控中的關(guān)系。
　　 方法：SD大鼠36 只，隨機(jī)分為A、B、C、D、E、F 六組，每組6 只，進(jìn)行如下操作：A組動(dòng)物灌注、固定后取C3-C5 段DRG 及同側(cè)交感頸上神經(jīng)節(jié)，進(jìn)行SP和TH 免

5、疫組化染色，觀察免疫反應(yīng)纖維在DRG和SG 中分布；B組動(dòng)物應(yīng)用HRP神經(jīng)順行追蹤法，C組動(dòng)物應(yīng)用Bb 神經(jīng)逆行追蹤法觀察DRG和SG的神經(jīng)纖維聯(lián)系，D組作為對照；E組動(dòng)物切除交感神經(jīng)節(jié)及交感干后測定雙上肢50[％]機(jī)械縮腿閾值，F(xiàn)組作為對照。
　　 結(jié)果：頸脊神經(jīng)節(jié)中有大量的SP 陽性胞體和纖維，無ＴＨ陽性細(xì)胞，但有一些TH 陽性纖維和終末；交感頸上節(jié)中ＴＨ陽性胞體和纖維大量存在，環(huán)繞著節(jié)細(xì)胞及其衛(wèi)星細(xì)胞，無SP 陽性胞體，但

6、有陽性纖維和終末不均勻地分布；交感頸上節(jié)內(nèi)注射ＨＲＰ后，可在同側(cè)Ｃ1-Ｃ8 段脊神經(jīng)節(jié)觀察到標(biāo)記細(xì)胞，脊神經(jīng)節(jié)內(nèi)注射Ｂb 后，可在同側(cè)交感頸上節(jié)內(nèi)觀察到Ｂb 標(biāo)記神經(jīng)元胞體；交感神經(jīng)切除后上肢50[％]縮腿閾值二周達(dá)到穩(wěn)定，與對照組相比閾值顯著升高(P<0.05)。
　　 結(jié)論：交感節(jié)后纖維可直接到達(dá)DRG 并與節(jié)細(xì)胞發(fā)生接觸，通過作用于DRG 胞體來調(diào)節(jié)初級(jí)感覺信息的傳入；另外SG 內(nèi)的SP 纖維來自于DRG 初級(jí)傳入神經(jīng)元的

7、軸突，提示DRG和SG 神經(jīng)元在中樞外存在反射調(diào)節(jié)機(jī)制；交感神經(jīng)切除提高了大鼠痛閾，使其痛覺敏感性降低。
　　 第二部分頸椎小關(guān)節(jié)在頸源性頭頸痛中的作用及其機(jī)制
　　 實(shí)驗(yàn)一
　　 目的：研究頸椎小關(guān)節(jié)的神經(jīng)支配來源及其通路，為闡明小關(guān)節(jié)損傷后彌漫性頭頸肩部疼痛的機(jī)制及其治療提供依據(jù)。
　　 方法：39 只SD 雄性大鼠，分為頸交感神經(jīng)未切除組(A組，18 只)、切除組(B組，18 只)及對照組(C組，3

8、 只)，A、B組分別于C1-2、C3-4和C5-6小關(guān)節(jié)囊注射5[％]雙苯甲亞胺(Bb)0.6μl，C組注射等量生理鹽水。8h后檢查各組C1-C8 脊神經(jīng)節(jié)(DRG)和交感神經(jīng)節(jié)(SG)的熒光標(biāo)記細(xì)胞，并作統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　 結(jié)果：A組脊神經(jīng)節(jié)和交感神經(jīng)節(jié)內(nèi)均可見到熒光標(biāo)記細(xì)胞，其中，C1-2和C3-4關(guān)節(jié)囊內(nèi)注射組C1-C8 DRG 內(nèi)有Bb(+)細(xì)胞，C5-6 關(guān)節(jié)囊內(nèi)注射組的C3-C8 DRG 內(nèi)可見Bb(+)細(xì)胞，B組注

9、射節(jié)段和相鄰節(jié)段Bb(+)細(xì)胞無明顯減少，但遠(yuǎn)節(jié)段的Bb(+)細(xì)胞明顯減少；C組未見Bb(+)細(xì)胞。
　　 結(jié)論：頸椎小關(guān)節(jié)囊神經(jīng)支配來源于感覺和交感神經(jīng)系統(tǒng)，脊神經(jīng)節(jié)和交感神經(jīng)節(jié)間有神經(jīng)纖維聯(lián)系，阻斷脊神經(jīng)和交感神經(jīng)在臨床上有可能緩解患者的頭頸肩痛癥狀。
　　 實(shí)驗(yàn)二
　　 目的：三叉神經(jīng)節(jié)和上位頸脊髓后根在解剖和功能上有密切的聯(lián)系，本實(shí)驗(yàn)觀察了三叉神經(jīng)節(jié)(TG)中P 物質(zhì)(SP)免疫反應(yīng)物的分布，并探討C1-

10、3小關(guān)節(jié)和三叉神經(jīng)節(jié)(TG)間的神經(jīng)纖維聯(lián)系及其在頸源性頭痛(CeH)中的外周作用機(jī)制。
　　 方法：40 只SD 雄性大鼠，隨機(jī)分為5組，前4組分別于C1-2、C2-3、C3-4、C4-5 單側(cè)小關(guān)節(jié)囊注射5[％]雙苯甲亞胺(Bb)0.6μl，8小時(shí)后檢查TG 熒光標(biāo)記細(xì)胞，第5組觀察TG 中P 物質(zhì)(SP)免疫反應(yīng)物的分布。結(jié)果作統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　 結(jié)果：C1-2、C2-3、C3-4組TG 中可見到熒光標(biāo)記細(xì)胞，其中

11、C3-4組熒光標(biāo)記細(xì)胞明顯減少，C4-5組未見熒光標(biāo)記細(xì)胞；TG 中SP 免疫陽性細(xì)胞不均勻地分布于周圍突中，熒光標(biāo)記細(xì)胞和SP 免疫陽性細(xì)胞均以中小型細(xì)胞為主，發(fā)出細(xì)的薄髓和無髓纖維。
　　 結(jié)論：C1-3小關(guān)節(jié)有來源于TG 中樞突的側(cè)支或周圍突的SP 神經(jīng)纖維分布，寰枕、寰樞或C2-3小關(guān)節(jié)的不穩(wěn)定或病變可引起枕頸部的疼痛和三叉神經(jīng)支配區(qū)的疼痛，此種疼痛不同于中樞匯聚機(jī)制所導(dǎo)致的牽涉痛，表明CeH 存在中樞外的反射機(jī)制。

12、r>　　 第三部分SNL大鼠外周神經(jīng)節(jié)NPY及其受體的基因表達(dá)和意義
　　 目的：NPY 及其受體在調(diào)控軀體感覺傷害性信息中發(fā)揮著重要的作用，周圍神經(jīng)損傷后，NPY 及其受體mRNA在脊神經(jīng)節(jié)的表達(dá)發(fā)生可塑性變化，然而頸神經(jīng)損傷后DRG中神經(jīng)肽與其受體之間的確切關(guān)系仍不清楚，本研究在大鼠頸神經(jīng)根性痛模型中觀察了DRG 中NPY、Y1R和Y2R的表型變化，以期能闡明神經(jīng)病理性痛的外周發(fā)病機(jī)制，為未來新藥的開發(fā)提供靶點(diǎn)。
　

13、　 方法：制作大鼠頸神經(jīng)病理痛模型(SNL 模型)，手術(shù)組、假手術(shù)組和正常對照組動(dòng)物分別于術(shù)后7d、14d 灌注后取左側(cè)C5和C6 脊髓背根神經(jīng)節(jié)，應(yīng)用免疫熒光染色、聚合酶鏈反應(yīng)和Western 印記分析技術(shù)檢測了SNL大鼠不同時(shí)間點(diǎn)DRG 中NPY、Y1R和Y2R基因和蛋白的表達(dá)變化。
　　 結(jié)果：假手術(shù)組和對照組DRG 中無NPY 免疫反應(yīng)陽性細(xì)胞和神經(jīng)纖維顯示，神經(jīng)損傷后，DRG內(nèi)出現(xiàn)NPY 陽性細(xì)胞，主要位于小型細(xì)胞；

14、假手術(shù)組和對照組DRG 中可見Y1R和Y2R 紅色熒光標(biāo)記，神經(jīng)損傷后，Y1R和Y2R 表達(dá)增強(qiáng)，其中Y1R 主要見于小型細(xì)胞，Y2R 主要見于大型細(xì)胞。NPY和Y1R、Y2R 雙標(biāo)神經(jīng)元主要是大細(xì)胞。假手術(shù)組和對照組DRG 中不表達(dá)或極低水平表達(dá)NPY mRNA和蛋白，但可見Y1R和Y2R的表達(dá)，它們傷后表達(dá)水平均顯著上調(diào)(P<0.01)。
　　 結(jié)論：Y1R和Y2R在調(diào)節(jié)痛敏中有重要作用，NPY 參與抗傷害作用是通過其受體完