白藜蘆醇對高脂喂養(yǎng)C57BL-6J小鼠肝臟脂代謝及LXRα蛋白表達影響的實驗研究.pdf

1、近年來，隨著我國經(jīng)濟的發(fā)展和居民生活水平的提高，我國的膳食結(jié)構(gòu)正在逐漸向西方化轉(zhuǎn)變，膳食高能量、高脂肪和體力活動減少造成非酒精性脂肪肝病(non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD)的發(fā)病率快速上升。肝臟是機體脂代謝的中心器官，涉及肝臟對外源性脂質(zhì)的消化吸收，肝內(nèi)脂蛋白的代謝、膽固醇的轉(zhuǎn)化與分解等多個環(huán)節(jié)。若其中一個或多個環(huán)節(jié)出現(xiàn)異常，就可能破壞脂肪酸的攝取、氧化、合成、酯化和甘油三酯及膽固醇轉(zhuǎn)運的動

2、態(tài)平衡，造成脂質(zhì)代謝紊亂。因此，預防和改善NAFLD的發(fā)生發(fā)展對促進我國人民的健康具有十分重要的現(xiàn)實意義。
　　 白藜蘆醇( resveratrol，RSV)是一種植物多酚類物質(zhì)，著名的“法國悖論”流行病學調(diào)查顯示RSV具有保護心血管的作用。動物實驗發(fā)現(xiàn)RSV可以降低小鼠肝臟TG和TC水平，但其具體機制尚不明確。肝X受體α(liver X receptorα，LXRα)在肝臟廣泛表達，LXR與視黃醛衍生物受體(retinoid

3、X receptor，RXR)結(jié)合成雜聚二聚體形式才能發(fā)揮作用。膽固醇的一些代謝產(chǎn)物如羥基固醇24s，25-環(huán)氧膽固醇等是其內(nèi)源的激活配體。雜聚二聚體LXR/RXR通過直接結(jié)合在靶基因的DR4序列位點來調(diào)節(jié)靶基因的表達。其中靶基因產(chǎn)物包括ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)移子家族(ATP-binding cassettes，ABCs)，固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白(sterol regulatoryelement binding protein，SREBP)，脂蛋

4、白脂酶(lipoprotein lipase，LPL)，膽固醇酯轉(zhuǎn)運蛋白( cholesterol ester transfer protein，CETP)，載脂蛋白E(apolipoproteinE，ApoE)等。LXRs可通過這些基因編碼相應的蛋白來調(diào)節(jié)脂質(zhì)和膽固醇的代謝。
　　 本實驗在對C57BL/6J小鼠喂飼高脂飼料的同時給予RSV(22.5mg/kg.bw.d)進行灌胃干預，觀察了其對C57BL/6J小鼠肝臟脂代謝和

5、LXRα蛋白表達的影響，旨在闡明RSV對C57BL/6J小鼠肝臟脂代謝的影響及其機制。
　　 材料和方法:
　　 一、動物的分組與喂養(yǎng)
　　 C57BL/6J小鼠60只，適應性喂養(yǎng)1w后，按體重隨機分為基礎組、高脂組和RSV干預組，每組20只?；A組和高脂組在每天分別喂飼基礎飼料和高脂飼料的基礎上給予0.5％的羧甲基纖維素鈉溶液灌胃，白藜蘆醇干預組在喂飼高脂飼料的同時每天給予0.5％的羧甲基纖維素鈉溶液溶解的濃度

6、為22.5mg/kg.bw.d的白藜蘆醇灌胃。實驗期間，各組小鼠自由攝食飲水，每周稱量體重2次。
　　 二、測定指標及方法
　　 在實驗進行到第8w和第16w時，每組分別取10只小鼠測定相應的指標：
　　 1、肝臟病理學
　　 小鼠脫頸椎處死，解剖并分離肝臟。從肝右葉中部切取1.0×0.5×0.3cm大小的肝組織放入預先配置好的中性甲醛固定液中，制作成HE切片在顯微鏡下觀察肝組織病理改變。
　　

7、2、肝指數(shù)
　　 肝指數(shù)(％)=肝臟濕重(g)/體重(g)×100
　　 3、肝臟中TG、TC含量
　　 用電子天平稱取150mg～200mg肝組織，加入3倍體積的甲醇進行勻漿，待勻漿無阻力后再加入6倍體積的氯仿，漩渦混勻器混勻制成10％的組織勻漿。室溫放置過夜，小心抽取下層有機溶劑層，按試劑盒說明測定有機溶劑層中TG、TC含量。
　　 4、肝臟游離脂肪酸(nonesterified fatty acid

8、s，NEFA)
　　 取50mg-100mg肝組織，用生理鹽水制成10％組織勻漿，3000r/min離心15min，小心吸取上清液，按照試劑盒說明測定NEFA含量。
　　 5、肝臟中LXRα蛋白的表達
　　 利用RIPA蛋白裂解液提取肝組織總蛋白，紫外分光光度計測定所提蛋白溶液濃度。經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳，轉(zhuǎn)印，封閉，TBS-T洗膜，一抗4℃孵育過夜，TBS-T洗膜，二抗孵育2h，TBS-T洗膜，ECL法顯色。利用

9、圖像分析軟件，用所測蛋白條帶灰度值/β-actin條帶灰度值作為該蛋白的相對表達量。
　　 三、數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計分析
　　 用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，實驗結(jié)果用(?)±S表示，用單因素方差分析比較各組指標間的統(tǒng)計學差異。檢驗水準：α=0.05
　　 結(jié)果:
　　 一、動物一般狀況及體重變化
　　 實驗期間，各組小鼠生長發(fā)育未見異常情況。各組小鼠體重增量8w和16w均為高脂組最多，RSV

10、干預組最少，但各組間差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　 二、各組小鼠肝臟病理改變
　　 8w各組小鼠肝臟大體標本未見異常，HE切片下組織細胞形態(tài)正常。16w高脂組小鼠肝臟大體標本略呈黃褐色，有油膩感，HE切片下可見大量脂肪空泡形成，基礎組和RSV干預組肝臟大體標本未見異常，HE切片下干預組與基礎組相似，肝細胞未見脂肪變性改變。
　　 三、各組小鼠肝指數(shù)
　　 8w和16w小鼠肝指數(shù)，各組間差異均無統(tǒng)

11、計學意義（P＞0.05）。
　　 四、各組小鼠肝臟TG、TC含量
　　 8w小鼠肝臟TG水平，各組間差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），16w小鼠肝臟TG水平，高脂組明顯高于基礎組和干預組(P＜0.05)，而干預組和基礎組相比，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);8w和16w小鼠肝臟TC水平，高脂組均明顯高于基礎組和干預組（P＜0.05），而干預組和基礎組相比，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　 五、各組小鼠

12、肝臟NEFA含量
　　 8w和16w，各組小鼠肝臟NEFA含量均以高脂組最高，基礎組最低，但各組間差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　 六、各組小鼠肝臟LXRα蛋白表達
　　 8w各組小鼠肝臟LXRα蛋白相對表達量，各組間差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。16w各組小鼠肝臟LXRα蛋白相對表達量，干預組最高，高脂組最低，且兩組間差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　 結(jié)論:
　　 1、白藜蘆