異染色質(zhì)蛋白HP1α和核纖層蛋白A生物學(xué)功能研究.pdf

1、異染色蛋白1(Heterochromatinprotein1，HP1)是結(jié)合在異染色質(zhì)上的一個蛋白，對于基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控、端粒的沉默與加帽、腫瘤的發(fā)生等緊密相關(guān)。HP1具體生物學(xué)功能仍存在許多未知的領(lǐng)域，人們普遍關(guān)注于它在異染色質(zhì)層次上的功能研究。本課題研究旨在揭示HP1α在染色質(zhì)低級結(jié)構(gòu)方面的生物學(xué)功能，主要從組蛋白、組蛋白和DNA復(fù)合物、核小體三個層次去研究其生物學(xué)作用，從而揭示異染色質(zhì)的形成過程。
　　 本論文主要運(yùn)用了GS

2、T-HP1α的pulldown技術(shù)、交聯(lián)劑BS3交聯(lián)技術(shù)、Westernblot技術(shù)、生物素標(biāo)記DNA技術(shù)、電泳遷移率實驗(ElectrophoreticMobilityShiftAssay，EMSA)等方法來研究這三個層次。本論文的研究揭示了HP1α可能起著一個分子伴侶的作用，協(xié)助組蛋白二聚體組裝到組蛋白四聚體和DNA復(fù)合物上，并起著一定的穩(wěn)定核小體的作用。HP1α對于不同的組蛋白變體的作用強(qiáng)弱亦不相同，比如HP1α對于H2A.Z-H

3、2B二聚體結(jié)合能力強(qiáng)于H2A-H2B二聚體，而HP1α能促進(jìn)H2A核小體的形成，卻對H2A.Z核小體的分子伴侶能力較弱。H3.3變體對于HP1α結(jié)合能力的影響不是很顯著。綜上所述，HP1α在核小體形成過程中可能起到一定的分子伴侶作用，但具體功能還受組蛋白變體影響，機(jī)制比較復(fù)雜，還需要我們進(jìn)一步的研究探索。
　　 在細(xì)胞核內(nèi)，異染色質(zhì)是通過DNA和核纖層蛋白(Lamin)結(jié)合而錨定到核膜。兒童早衰綜合征是LaminA基因發(fā)生了一個

4、堿基的突變，形成了一個隱蔽剪切位點，導(dǎo)致LaminA前體在翻譯后修飾時不能正常被切割而形成了截斷蛋白progeria。端粒DNA與人類的衰老更是密切相關(guān)，端粒3'懸突富含多個重復(fù)G序列，在一定條件下可以形成G四聯(lián)體(G4)的結(jié)構(gòu)。G4結(jié)構(gòu)的形成抑制了端粒對端粒酶的招募，使得端粒末端無法延長，抑制了腫瘤的發(fā)生。根據(jù)我們前期研究，G4和LaminA都與衰老緊密相關(guān)，兩者之間是否有一定的聯(lián)系，這是本課題研究的出發(fā)點。
　　 本研究主要