鼠傷寒沙門(mén)氏菌作為基因治療載體的研究.pdf

1、該實(shí)驗(yàn)通過(guò)全菌PCR從大腸桿菌中擴(kuò)增了全長(zhǎng)的胞嘧啶脫氨酶基因(CD基因),DNA測(cè)序 結(jié)果表明其核苷酸序列與文獻(xiàn)報(bào)道的完全一致.構(gòu)建了CD基因的原核表達(dá)載體pBV-CD,并進(jìn)行原核表達(dá),表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)SDS-PAGE及薄層掃描檢測(cè)分析可知其蛋白質(zhì)分子量正確(49kD),表達(dá)量較高(約88﹪);用表達(dá)產(chǎn)物制備了兔的抗血清.構(gòu)建了CD基因的真核表達(dá)載體pc-CD, 用脂質(zhì)體法將質(zhì)粒轉(zhuǎn)染腫瘤細(xì)胞株,加G418選擇出有抗性的細(xì)胞株.用MTT法評(píng)價(jià)結(jié)

2、果表明 :正確表達(dá)CD基因的細(xì)胞株能將原藥5-氟胞嘧啶轉(zhuǎn)變?yōu)閷?duì)細(xì)胞有毒性的5-氟尿嘧啶,通過(guò)旁觀者效應(yīng)殺傷腫瘤細(xì)胞,證實(shí)CD基因在真核細(xì)胞中表達(dá)良好.通過(guò)侵襲實(shí)驗(yàn)比較了幾株鼠傷寒沙門(mén)氏菌(3235,3261,4072)的侵襲力,用侵襲力相對(duì)較高的4072作為呈遞質(zhì)粒的菌株.以鼠肝癌細(xì)胞株SMMC7721在裸鼠皮下成瘤,用帶有pCDNA3.1-CD質(zhì)粒的4072口服灌胃,并加 以原藥,結(jié)果表明與對(duì)照組相比實(shí)驗(yàn)組明顯能夠抑制腫瘤生長(zhǎng),延長(zhǎng)荷