P388D1細胞中P2X-,7-受體與CD44分子表達及其作用.pdf

1、目的：檢測P388D1細胞表面是否表達有功能的P2X7受體，證明P2X7受體與P388D1細胞表面表達的CD44分子間的相關(guān)性，進一步探討P2X7受體與腫瘤細胞轉(zhuǎn)移的相關(guān)性。 方法：為了研究P388D1細胞中P2X7受體表達情況及P2X7受體的活性，作者等采用RT-PCR、Westernblotting、免疫熒光從基因及蛋白水平檢測P2X7受體表達情況，采用顯微鏡觀察激動劑刺激后細胞膜變化的方法對P2X7受體的活性進行檢測；為了

2、研究P2X7受體被其激動劑ATP活化后與P388D1細胞表面表達的CD44分子相關(guān)性，作者等應用流式細胞術(shù)檢測ATP作用后P388D1細胞表面CD44分子平均熒光強度的改變；為了明確ATP刺激后P388D1細胞表面CD44分子熒光強度的改變是由P2X7受體介導，作者等應用流式細胞術(shù)檢測使用P2X7受體的特效拮抗劑KN-62預處理的P388D1細胞表面CD44分子平均熒光強度的變化；為了證明P2X7受體與腫瘤細胞轉(zhuǎn)移之間的相關(guān)性作者等采用

3、Transwell體外遷移實驗比較ATP作用前后P388D1細胞遷移率的變化。 結(jié)果：RT-PCR、Westernblotting、免疫熒光結(jié)果均證明P388D1細胞表面表達P2X7受體。顯微鏡觀察激動劑刺激后，細胞膜膜泡形成證明P388D1細胞表達的P2X7受體有活性。ATP時間組和劑量組的流式細胞儀結(jié)果均證明P388D1細胞經(jīng)P2X7受體激動劑ATP作用后細胞表面CD44分子的平均熒光強度顯著降低，即CD44分子表達量降低。

4、應用P2X7受體的特效拮抗劑KN-62抑制P2X7受體的活性后，ATP未能導致P388D1細胞表面CD44分子平均熒光強度降低，此結(jié)果表明，ATP作用P388D1細胞后導致CD44分子表達量的降低是由P2X7受體介導的。Tanswell體外遷移實驗的結(jié)果證明P2X7受體被ATP活化后能夠降低腫瘤細胞的遷移率。 結(jié)論：P2X7受體經(jīng)ATP作用后使P388D1細胞表面表達的CD44分子的量顯著降低，同時腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移能力亦隨之減弱。