肝素對小鼠淋巴瘤細胞P388D1淋巴道轉(zhuǎn)移的抑制作用.pdf

1、本實驗旨在探討肝素在P388D1細胞淋巴道轉(zhuǎn)移中的作用，同時也進一步研究L-選擇蛋白介導(dǎo)腫瘤細胞淋巴道轉(zhuǎn)移的作用機制，為肝素抑制腫瘤轉(zhuǎn)移提供較有利的實驗依據(jù)。 目的：本實驗選取淋巴瘤細胞P388D1為研究對象，以DBA小鼠為實驗動物，采用黏附實驗、歸巢實驗和整體實驗來探討肝素對P388D1細胞小鼠淋巴道轉(zhuǎn)移的抑制作用，為肝素用于治療腫瘤淋巴道轉(zhuǎn)移奠定堅實基礎(chǔ)。 方法：利用MTT實驗方法，流式細胞技術(shù)、RT-PCR技術(shù)、免

2、疫組化、動物體內(nèi)實驗等一系列實驗方法，輔之以小鼠淋巴結(jié)冰凍切片黏附實驗，歸巢實驗及整體實驗，來驗證肝素的細胞毒性，探討肝素阻止CFSE標記的P388D1細胞在小鼠淋巴結(jié)的滯留以及肝素抑制P388D1細胞轉(zhuǎn)移到小鼠各淋巴結(jié)的情況。 結(jié)果：1.MTT實驗結(jié)果表明，100u的肝素對細胞沒有毒性作用； 2.體外黏附實驗的結(jié)果顯示肝素能夠競爭抑制P388D1細胞表達的L-選擇蛋白同DBA小鼠淋巴結(jié)上配體的結(jié)合，從而降低P388D1

3、細胞同淋巴結(jié)的黏附，其黏附結(jié)果為：對照組平均細胞粘附數(shù)為個5.34±0.96個/μm2；實驗組平均細胞粘附數(shù)為個0.69±0.21個/μm2。實驗組與對照組之間存在顯著性差異(P＜.001)。 3.歸巢實驗的結(jié)果：CFSE標記的P388D1細胞足墊注射1h后的流式細胞儀檢測結(jié)果沒有統(tǒng)計學(xué)意義，而12h流式細胞儀的檢測結(jié)果表明，停留在小鼠腘窩的標記細胞數(shù)具有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.01)，由此可以推斷肝素能夠阻止CFSE標記的P388

4、D1細胞在小鼠淋巴結(jié)的滯留。 4.整體實驗的結(jié)果表明：對照組和實驗組小鼠各部位的淋巴結(jié)石蠟切片顯示，對照組小鼠的各部位淋巴結(jié)均有腫瘤細胞生長，轉(zhuǎn)移率為100﹪，而用肝素的實驗組有很大不同，小鼠各部位的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率為：腘窩100﹪、腹股溝70﹪、腋下淋巴結(jié)30﹪。此實驗結(jié)果表明，肝素的確能夠抑制P388D1細胞的淋巴道轉(zhuǎn)移。 5.RT-PCR及免疫組化實驗結(jié)果提示P388D1細胞表達CD147，而正常淋巴結(jié)細胞不表達CD1