分枝桿菌分枝菌酸的反相高效液相色譜分型鑒定技術(shù)方法研究與應(yīng)用.pdf

1、結(jié)核病具有高流行性和高傳染性，至今仍是一個(gè)嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題。WHO已將結(jié)核病作為重點(diǎn)控制的傳染病之一，據(jù)估計(jì)全球約有1/3的人感染結(jié)核菌，每秒有1個(gè)新增病例（WHO，2006年）。分枝桿菌在微生物分類中屬于放線菌目、分枝桿菌科，臨床主要致病的是結(jié)核分枝桿菌（MTB），此外還有非結(jié)核分枝桿菌（NTM），NTM所引起的結(jié)核樣病變與結(jié)核臨床表現(xiàn)相似，但治療方案和抗藥性根據(jù)不同種屬有所不同。因此對(duì)分枝桿菌做出及時(shí)準(zhǔn)確的分型鑒定、檢測(cè)對(duì)控制結(jié)核

2、病疫情具有十分重要的現(xiàn)實(shí)意義。 分枝菌酸（MA）是一類高分子量的含有α-支鏈、β-羥基脂肪酸的化合物，是所有分枝桿菌細(xì)胞壁脂質(zhì)的主要組分，其脂肪酸上碳鏈的長(zhǎng)度、不飽和狀態(tài)、官能團(tuán)及其含量與生物種型有關(guān)，且各生物種型之間MA呈現(xiàn)指紋特征。 本論文的目的是通過(guò)采用反相高效液相色譜法（RP-HPLC）分析比較樣品中MA之間的差異，建立快速靈敏準(zhǔn)確的分枝桿菌種間分型鑒定的HPLC標(biāo)準(zhǔn)方法，并構(gòu)建分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株的MA指紋譜庫(kù)，為

3、分枝桿菌的分型鑒定提供了重要的技術(shù)方法和譜庫(kù)數(shù)據(jù)補(bǔ)充。全文分為四章： 第一章前言，簡(jiǎn)要介紹了分枝桿菌分型鑒別及檢測(cè)方法的研究現(xiàn)狀和存在問題，尤其介紹了HPLC方法的應(yīng)用。并在此基礎(chǔ)上提出了本論文的研究目的和研究?jī)?nèi)容。 第二章建立了以甲醇和二氯甲烷為流動(dòng)相的梯度洗脫RP-HPLC法。分枝桿菌經(jīng)過(guò)接種、培養(yǎng)、皂化、酸化及衍生化后，采用RP-HPLC進(jìn)行分析，建立了快速靈敏準(zhǔn)確的分枝桿菌種間分型鑒定的RP-HPLC標(biāo)準(zhǔn)方法。

4、 第三章采用第二章所建立的方法，構(gòu)建了49種《伯杰細(xì)菌鑒定手冊(cè)》中所載入的分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株（來(lái)源于ATCC（美國(guó)標(biāo)準(zhǔn)菌種收藏中心））的MA指紋譜庫(kù)。通過(guò)對(duì)各個(gè)譜圖進(jìn)行詳細(xì)分析，依據(jù)峰的分布特點(diǎn)可將其分為單簇（14種）、雙簇（23種）、三簇及多簇（12種）三類，而后根據(jù)相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰高比的比例進(jìn)行種間水平鑒別。此法成功鑒別了41種分枝桿菌（其余8種難以采用此法準(zhǔn)確鑒別），對(duì)于難以鑒別的部分菌種嘗試采用GC法對(duì)其進(jìn)行進(jìn)一步分型鑒