子宮內(nèi)膜異位癥患者CYP19基因多態(tài)性分析.pdf

1、目的：子宮內(nèi)膜異位癥（Endometriosis，EMs）是婦科的常見病和多發(fā)病，其發(fā)病率達(dá)10％-15％，近年來其發(fā)病率有明顯增高的趨勢。是造成育齡期婦女盆腔疼痛和不孕癥的重要原因，嚴(yán)重危害廣大婦女的身心健康。盡管關(guān)于子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病原因?qū)W說很多，但是究其發(fā)病機(jī)理及病因?qū)W尚不明確。國內(nèi)外許多學(xué)者對子宮內(nèi)膜異位癥的遺傳易感性、環(huán)境、激素、免疫等諸多影響因素研究后認(rèn)為：子宮內(nèi)膜異位癥是具有多種發(fā)病因素的多基因的遺傳病，其中遺傳、激素及

2、其受體的影響已經(jīng)得到了廣大學(xué)者的公認(rèn)。子宮內(nèi)膜具有典型的受激素調(diào)節(jié)的周期性變化，異位內(nèi)膜在局部和血液循環(huán)中雌激素的共同作用下生長，并且異位內(nèi)膜的雌激素合成增加、滅活減少，這些特性說明子宮內(nèi)膜異位癥是一種雌激素的依賴性疾病。芳香化酶p450（aromatase cytochrome p450.p450arom）是雌激素合成過程中的最后一步限速酶，其主要作用是將雄烯二酮和睪酮轉(zhuǎn)化為雌酮和雌二醇。正常子宮內(nèi)膜無芳香化酶p450的表達(dá)，但是在異

3、位病灶以及子宮內(nèi)膜異位癥患者的在位內(nèi)膜中芳香化酶p450的表達(dá)異常。芳香化酶p450是細(xì)胞色素P450酶超家族的一種，由血紅蛋白和酶蛋白構(gòu)成，是CYP19基因編碼的產(chǎn)物，是細(xì)胞色素P450產(chǎn)物中唯一由單基因編碼的酶。存在于CYP19基因上單核苷酸多態(tài)性（single nuleotidepolymorphism，SNPs）位點(diǎn)突變可能通過其產(chǎn)物芳香化酶p450的變化而影響雌激素的合成。近年來研究與CYP19基因多態(tài)性有關(guān)的雌激素依賴性疾病

4、有乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌、骨質(zhì)疏松、子宮肌瘤、子宮內(nèi)膜異位癥等。目前研究發(fā)現(xiàn)CYP19基因有許多單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)，如：密碼子39（Trp-Arg）、密碼子264（Arg-Cys）、408（沉默子）、內(nèi)含子4中的4核苷酸（TTTA）的串聯(lián)重復(fù)（如重復(fù)次數(shù)達(dá)10次以上稱長等位基因，重復(fù)次數(shù)小于9次者稱短等位基因））以及插入/缺失多態(tài)性等等。本研究旨在探討CYP19基因115T/C、240 A/G、1531 C/T三個位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性與子宮內(nèi)

5、膜異位癥發(fā)病風(fēng)險的關(guān)系。
　　 方法：研究組：選自2006年10月-2008年9月河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院收治的經(jīng)腹腔鏡或剖腹手術(shù)治療，并經(jīng)大體及病理檢查診斷為子宮內(nèi)膜異位癥者102例。年齡在20-45歲的Ⅲ、Ⅳ期的子宮內(nèi)膜異位癥的患者（按照美國生育學(xué)會1985年修訂的子宮內(nèi)膜異位癥分期標(biāo)準(zhǔn)r-AFS評分）。對照組：選擇同期在我院行輸卵管復(fù)通術(shù)、因不孕癥、縱隔子宮等行腹腔鏡檢查、畸胎瘤、卵巢單純囊腫行腹腔鏡手術(shù)的患者，術(shù)中肉眼及術(shù)后

6、病理排除子宮內(nèi)膜異位癥者100例。所有病人排除乳腺癌，骨質(zhì)疏松，妊娠，子宮內(nèi)膜息肉、子宮肌瘤、子宮內(nèi)膜癌及其它婦科惡性腫瘤，先天性或繼發(fā)的與激素合成和代謝相關(guān)的疾病，近期無服用激素類藥物及免疫抑制類藥物的生育期婦女。兩組對象均為河北省漢族人，無血緣關(guān)系。
　　 采取試驗對象的肘靜脈血1-2ml，EDTA抗凝，提取全基因組DNA，分別用多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）技術(shù)擴(kuò)增包括CYP19基因115T/C、240A/G、1531C/T多態(tài)

7、位點(diǎn)的基因片段，再將各目的基因加入相應(yīng)的限制性內(nèi)切酶進(jìn)行消化，酶切產(chǎn)物在3％的瓊脂糖凝膠上加100V電壓電泳60-90min，紫外分析儀觀察酶切結(jié)果，根據(jù)產(chǎn)物的大小判斷每例樣本的基因型，用直接計數(shù)法計算出各等位基因的表型頻率，進(jìn)行x2檢驗，看是否符合Hard-Weinberg遺傳平衡定律，用x2檢驗及OR值分析CYP19基因115 T/C、240 A/G、1531 C/T多態(tài)性與子宮內(nèi)膜異位癥的關(guān)系，應(yīng)用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計。<

8、br>　　 結(jié)果：
　　 1、對子宮內(nèi)膜異位癥組和對照組CYP19基因115T/C，240A/G，1531C/T三個多態(tài)性位點(diǎn)基因型頻率進(jìn)行Hardy-Weinberg平衡檢驗，結(jié)果示P>0.05。表明已達(dá)遺傳平衡。
　　 2、CYP19基因115 T/C的三種基因型：TT/TC/CC在研究組的攜帶率分別為93（91.18％）、9（8.82％）、0（0％），在對照組分別為88（88％）、11（11％）、1（1％），兩組

9、間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（x2=0.547，P=0.46）。說明沒有發(fā)現(xiàn)CYP19基因115T/C多態(tài)性與Ⅲ、Ⅳ期子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生具有相關(guān)性。T、C等位基因頻率在研究組和對照組分別為95.6％、4.41％和93.5％、6.5％，兩者相比無統(tǒng)計學(xué)意義（x2=0.855，P=0.355）。與T/T基因型相比，攜帶C等位基因的基因型（T/C+C/C）不能改變Ⅲ、Ⅳ期子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)病的風(fēng)險，OR值為1.409（95％CI=0.566-3.508

10、）。本研究表明CYP19基因115 T/C多態(tài)性位點(diǎn)可能不是子宮內(nèi)膜異位癥獨(dú)立的危險因素。
　　 3、CYP19基因240A/G的三種基因型：AA/AG/GG在研究組的攜帶率分別為28（27.54％）、50（50.92％）、24（23.53％），在對照組分別為45（45％）、41（41％）、14（14％），兩組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（x2=7.462，P=0.024）。本研究表明CYP19基因240A/G多態(tài)性與Ⅲ、Ⅳ期子宮內(nèi)膜異位

11、癥的發(fā)生具有相關(guān)性。A、G等位基因頻率在研究組和對照組分別為51.96％、48.04％和65.5％、34.5％兩者相比有統(tǒng)計學(xué)意義（x2=7.643，P=0.006）。與A/A基因型相比，攜帶A等位基因的基因型（A/G+G/G）提高Ⅲ、Ⅳ期子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)病的風(fēng)險，OR.值為2.162（95％CI=1.203-3.888）。本研究表明240G/G基因型及等位基因可能是Ⅲ、Ⅳ期子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)生的危險因素。CYP19基因240 A/G多態(tài)

12、性可能與子宮內(nèi)膜異位癥的遺傳易感性相關(guān)。
　　 4、CYP19基因1531 C/T的三種基因型：CC/CT/TT在研究組的攜帶率分別為42（41.18％）、48（47.06％）、12（12.71％），在對照組分別為38（38％）、42（42％）、20（20％），兩組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（x2=2.580，P=0.275）。本研究表明沒有發(fā)現(xiàn)CYP19基因1531C/T多態(tài)性與Ⅲ、Ⅳ期子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生具有相關(guān)性。C、T等位基因頻

13、率在研究組和對照組分別為64.71％、35.30％和59％、41％兩者相比無統(tǒng)計學(xué)意義（x2=1.394，P=0.238）。與C/C基因型相比，攜帶T等位基因的基因型（C/T+T/T）不能改變Ⅲ、Ⅳ期子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)病的風(fēng)險，OR值為0.876（95％CI=0.498-1.540）。本研究表明CYP19基因1531C/T多態(tài)性位點(diǎn)可能不是子宮內(nèi)膜異位癥獨(dú)立的危險因素。
　　 結(jié)論：
　　 1、CYP19基因115T/C和