小麥EST-SSR標(biāo)記的開(kāi)發(fā)及其耐鹽基因的分子標(biāo)記.pdf

1、挖掘優(yōu)異耐鹽基因,培育耐鹽新品種,是改良和利用鹽漬化土地最為經(jīng)濟(jì)有效的策略。本研究利用NCBI等公共網(wǎng)站登錄的EST信息,開(kāi)發(fā)了一批小麥功能標(biāo)記,通過(guò)缺體四體作圖,定位這些基因涉及的基因組與染色體；研究還對(duì)濱海地區(qū)小麥地方品種的耐鹽性進(jìn)行了鑒定,篩選耐鹽新種質(zhì),并利用分子標(biāo)記揭示其遺傳多樣性；以篩選出的鹽脅迫反應(yīng)差異明顯的2個(gè)品種(絲籽麥與和尚麥)配制雜交組合,對(duì)絲籽麥中的耐鹽基因進(jìn)行了定位與分子標(biāo)記。結(jié)果表明： 根據(jù)小麥鹽脅迫

2、誘導(dǎo)等cDNA文庫(kù)中的EST序列開(kāi)發(fā)了81對(duì)EST-SSR引物,擴(kuò)增表明,67對(duì)(82.72％)在小麥、49對(duì)在黑麥(60.49％)、18對(duì)在簇毛麥(22.22％)和61對(duì)在大麥(75.31％)基因組中可以穩(wěn)定擴(kuò)增,其中22對(duì)(32.83％)在小麥品種中國(guó)春和輝縣紅間具有多態(tài),23對(duì)(37.71％)在大麥品種四棱大麥和寬穎裸麥間具有多態(tài)。利用19個(gè)中國(guó)春缺體四體系(除N3D和N6D)共定位了43個(gè)標(biāo)記81個(gè)位點(diǎn),涉及除3D、4B和6D以

3、外的18條染色體,其中B組位點(diǎn)30個(gè),A組均為29個(gè),D組為22個(gè),定位在不同部分同源群的位點(diǎn)依次為2＞1＞7＞4＞3＞6＞5。 明確了68份地方品種芽期和苗期耐鹽性,篩選出3份芽期(鹽害指數(shù)小于20％)和1份苗期(鹽害指數(shù)小于20％)耐鹽新種質(zhì)。40個(gè)gSSR標(biāo)記對(duì)30個(gè)不同耐鹽品種遺傳多樣性分析表明,品種間遺傳距離平均為0.46,變幅0.22-0.74,聚類(lèi)分析分為三類(lèi),其中第I類(lèi)包括絲籽麥等6份,第II類(lèi)包括和尚麥等21份

4、,第III類(lèi)僅包括大和尚頭、禿把麥和蜈蚣麥3份材料,為進(jìn)一步在遺傳育種中利用這些材料提供了信息。 以絲籽麥與和尚麥配制正反交組合,雜種F1和F2芽期耐鹽性鑒定表明,在250mmol·L-1NaCl濃度下,絲籽麥、正反交F1均能正常發(fā)芽而和尚麥不能發(fā)芽,F2的2441粒種子中發(fā)芽與不發(fā)芽比例符合3:1。依據(jù)BSA法,從410個(gè)gSSR或eSSR中篩選出144個(gè)在絲籽麥與和尚麥間具有多態(tài)的標(biāo)記,且Xgdm5和XSCM158在抗感池間