NF-κB在CD40配基化介導CA46細胞凋亡中作用的研究.pdf

1、目的：探討CD40配基化對人類Burkitt淋巴瘤細胞株CA46細胞NF-κ B活性的影響，NF-κ B活性改變對CA46細胞凋亡以及凋亡相關因子表達的影響及其可能機制。 方法：應用四氮唑藍快速比色法(MTT法)檢測可溶性重組人CD40L(soluble recombinant human CD40 Ligand，SrhCD40L)介導CD40配基化對CA46細胞增殖的影響，應用凝膠電泳遷移率變動分析 (Electrophore

2、tic Mobility Shift Assay，EMSA)檢測CD40配基化后NF-κ B與DNA序列的結(jié)合活性；應用MTT法、流式細胞術(shù)、DNA梯度電泳檢測特異性抑制劑吡咯烷二硫氨基甲酸酯(pyrrolidine dithiocarbamate，PDTC)抑制NF-κ B活性對細胞增殖、凋亡的影響，采用半定量逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈反應(RT-PCR)檢測NF-κ B活性受抑制后對bcl-2、survivin、p21、c-myc、hTERT

3、基因表達的影響，應用western blot蛋白免疫印跡法檢測NF-κ B活性受抑制對bcl-2、c-myc、p21蛋白表達的影響。 結(jié)果：srhCD40L介導CD40配基化作用可抑制CA46細胞的生長與增殖，可抑制CA46細胞NF-κ B的DNA結(jié)合活性：在CA46細胞系中，應用特異性抑制劑PDTC阻斷NF-κ B信號通路，可引起bcl-2、survivin、c-myc、hTERT表達下調(diào)和p21表達上調(diào)，抑制CA46細胞的生

4、長與增殖，并誘導CA46細胞凋亡，且隨著作用時間的延長，效應逐漸明顯。。 結(jié)論：CD40配基化作用可抑制CA46細胞的生長增殖并誘導細胞凋亡，在CA46細胞系中存在著NF-κ B信號通路，這條信號通路可能參與影響srhCD40L介導cD40配基化對人類Burkitt淋巴瘤CA46細胞的增殖、凋亡作用，其作用機制可能與CD40配基化抑制了NF-κ B的活性，下調(diào)抑凋亡相關因子bcl-2、survivin、c-myc、hTERT的表