PGC-1α在胰島細(xì)胞凋亡中的表達(dá)及其與NF-κB通路的關(guān)系.pdf

1、目的：2型糖尿病的主要發(fā)病機(jī)制是胰島素抵抗和胰島素分泌不足，許多的研究指出，加速的細(xì)胞凋亡導(dǎo)致了胰島細(xì)胞功能受損及胰島β細(xì)胞數(shù)量的減少，從而引起β細(xì)胞功能進(jìn)展性的損害。研究發(fā)現(xiàn)，過氧化物酶體增殖物激活受體γ輔激活因子-1α(PGC-1α)能拮抗凋亡刺激因子誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。核因子—kappa B(NF—κB)在相當(dāng)廣泛的病理生理過程中起調(diào)控作用，其中包括細(xì)胞凋亡現(xiàn)象，PGC-1α受不同信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路調(diào)控而表達(dá)上調(diào)或下降，NF—κB通路也是其

2、一，研究顯示NF—κB通路對(duì)PGC-1α的調(diào)節(jié)在幾種不同的細(xì)胞模型中并不一致，而且在胰島β細(xì)胞中它們的各自作用及相互作用仍不是很清楚。本研究擬用棕櫚酸培養(yǎng)的小鼠βTC3細(xì)胞作為細(xì)胞模型，以探討在脂毒性胰島β細(xì)胞凋亡模型中PGC-1α的表達(dá)及其與NF—κB經(jīng)典通路和非經(jīng)典通路的關(guān)系。 方法：⑴不同濃度棕櫚酸(0.25mM，0.50mM，1.0mM)處理的βTC3細(xì)胞12小時(shí)，利用Hoechst33258核熒光染色檢測(cè)棕櫚酸對(duì)胰島β

3、細(xì)胞凋亡的影響。⑵不同濃度棕櫚酸(0.25mM，0.50mM，1.0mM)處理βTC3細(xì)胞12小時(shí)后，利用RT—PCR方法檢測(cè)PGC-1α的mRNA表達(dá)。⑶不同濃度棕櫚酸(0.25mM，0.50mM，1.0mM)處理的βTC3細(xì)胞12小時(shí)，提取細(xì)胞總蛋白利用Western blot方法檢測(cè)NF—κB經(jīng)典通路中IKKβ、IKBα蛋白與非經(jīng)典通路中NIK、Rel—B蛋白的表達(dá)。⑷0.50mM棕櫚酸處理βTC3細(xì)胞4、6、8、10、12小時(shí)后

4、，提取細(xì)胞總蛋白利用Western blot方法檢測(cè)NF—κB經(jīng)典通路中IKKβ、IKBα蛋白與非經(jīng)典通路中NIK、Rel—B蛋白的表達(dá)。⑸在0.50mM棕櫚酸處理βTC3細(xì)胞前15分鐘預(yù)孵NF—κB經(jīng)典通路抑制劑MG132(5μM，10μM)，12小時(shí)后用RT—PCR的方法檢測(cè)PGC-1α的表達(dá)并用Hoechst33258核熒光染色檢測(cè)細(xì)胞凋亡。 結(jié)果：①Hoechst33258核熒光染色發(fā)現(xiàn)0.50mM及1.0mM棕櫚酸處理

5、組βTC3細(xì)胞凋亡率較正常對(duì)照組明顯增高(p<0.01)。②在不同濃度棕櫚酸(0.25mM，0.50mM，1.0mM)處理的βTC3細(xì)胞中，0.25mM處理組PGC-1α mRNA呈現(xiàn)表達(dá)上調(diào)(p<0.05)，0.50mM及1.0mM處理組表達(dá)下調(diào)(前者p<0.05，后者p<0.01)。③NF—κB經(jīng)典通路中IKKβ蛋白的表達(dá)在0.50mM及1.0mM濃度的棕櫚酸處理組較對(duì)照組呈現(xiàn)上調(diào)，并有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(前者p<0.05，后者p<0.01

6、)，IKBα蛋白的表達(dá)在0.50mM及1.0mM濃度的棕櫚酸處理組較對(duì)照組呈現(xiàn)下調(diào)，并有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(前者p<0.05，后者p<0.01)。NF—κB非經(jīng)典通路中NIK蛋白的表達(dá)隨著棕櫚酸的濃度增加呈現(xiàn)下調(diào)，且0.50mM及1.0mM濃度的棕櫚酸處理組與對(duì)照組之間有顯著差異(P<0.05)。Rel—B蛋白的表達(dá)隨著棕櫚酸的濃度增加呈現(xiàn)下調(diào)，且0.50mM及1.0mM濃度的棕櫚酸處理組與對(duì)照組之間有顯著差異(前者p<0.05，后者p<0.0

7、1)。④以0.50mM棕櫚酸處理4、6、8、10、12小時(shí)后，IKKβ蛋白的表達(dá)隨著棕櫚酸作用時(shí)間的延長(zhǎng)呈現(xiàn)上調(diào)，且10h及12h處理組與對(duì)照組之間有顯著差異(p<0.05)，IKBα蛋白的表達(dá)隨著棕櫚酸作用時(shí)間的延長(zhǎng)呈現(xiàn)下調(diào)，且12h處理組與對(duì)照組之間有顯著差異(p<0.05)。NIK蛋白的表達(dá)隨著棕櫚酸作用時(shí)間的延長(zhǎng)呈現(xiàn)下調(diào)，且10h及12h處理組與對(duì)照組之間有顯著差異(p<0.05)。Rel—B蛋白的表達(dá)隨著棕櫚酸作用時(shí)間的延長(zhǎng)呈

8、現(xiàn)下調(diào)，且12h處理組與對(duì)照組之間有顯著差異(p<0.05)。⑤在棕櫚酸處理前15分鐘預(yù)孵NF—κB經(jīng)典通路抑制劑MG132(5μM，10μM)，12小時(shí)后用RT—PCR的方法檢測(cè)PGC-1α的表達(dá)，預(yù)孵處理組PGC-1α表達(dá)相對(duì)于棕櫚酸處理組上調(diào)(p<0.05)，不同濃度MG132預(yù)孵處理組細(xì)胞凋亡率較棕櫚酸處理組顯著下降(p<0.01)。 結(jié)論：⑴在棕櫚酸誘導(dǎo)的βTC3細(xì)胞凋亡模型中，PGC-1α的mRNA的表達(dá)下調(diào)，PGC