苦參主要成分體外抗H3N2亞型豬流感病毒作用及其機(jī)制研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、豬流感(Swine Influenza, SI)是由豬流感病毒(Swine Influenza Virus,SIV)引起的一種急性、熱性、高度接觸性呼吸道傳染病,是規(guī)?;B(yǎng)豬場的常發(fā)病之一,以高致病率、低死亡率為特征。本病極易與其他呼吸道病原混合感染,使其死亡率急劇升高,給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。豬是豬流感、人流感及禽流感等多種流感病毒共同的易感宿主,流感病毒易在其體內(nèi)重組而產(chǎn)生新的流感病毒株。同時(shí),豬流感病毒不僅能感染豬,也能感染其

2、他動(dòng)物。因此,對(duì)豬流感病毒的研究不但有重要的獸醫(yī)傳染病學(xué)意義,更有深遠(yuǎn)的公共衛(wèi)生意義。流感病毒因血清型多、易變異以及易產(chǎn)生耐藥性等,疫苗接種及抗流感西藥的療效甚微,因此當(dāng)前尚無豬流感特效藥。所以,研究及開發(fā)抗豬流感病毒天然藥物及其有效成分迫在眉睫。
  目的:本研究旨在細(xì)胞水平上探討苦參主要成分的抗H3N2亞型豬流感病毒效果,并對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行初步探索。研究結(jié)果將為抗流感機(jī)制的深入研究提供基礎(chǔ),為獸醫(yī)臨床及醫(yī)學(xué)臨床用藥提供科學(xué)依據(jù)

3、和參考,更為抗流感病毒天然藥物的開發(fā)及研制奠定基礎(chǔ)。
  方法:采用傳統(tǒng)有機(jī)溶劑回流提取法、傳統(tǒng)水提醇沉法分別制備苦參生物堿、黃酮、皂苷和粗多糖成分,以利巴韋林作為陽性對(duì)照藥,選擇犬腎上皮細(xì)胞株(MDCK細(xì)胞)作為H3N2豬流感病毒作用的細(xì)胞體系,通過細(xì)胞病變(CPE)觀察法和噻唑藍(lán)鹽微量酶反應(yīng)比色法(MTT法)定性、定量測定細(xì)胞狀態(tài),從而對(duì)苦參生物堿、黃酮、皂苷、粗多糖成分抗H3N2豬流感病毒作用加以比較,然后通過改變給藥方式等

4、條件對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行初步探索。
  結(jié)果顯示:高濃度的苦參生物堿、黃酮、皂苷、粗多糖均會(huì)影響MDCK細(xì)胞的生長狀態(tài),其最大安全濃度分布在6.9μg/ml~1.5138 mg/ml之間,其中皂苷成分的毒性作用最小,濃度為1.5138 mg/ml時(shí)仍不表現(xiàn)細(xì)胞毒性作用。對(duì)四種成分體外抗SIV作用的研究發(fā)現(xiàn),四種成分都能顯著性抑制H3N2豬流感病毒,其中生物堿和粗多糖成分的效果優(yōu)于利巴韋林。此外,(1)四種成分均能明顯抵抗SIV的吸附,

5、皂苷效果優(yōu)于利巴韋林;(2)四種成分均能干擾病毒復(fù)制,生物堿的作用優(yōu)于利巴韋林;(3)四種成分與病毒同時(shí)接觸細(xì)胞時(shí),均有顯著抑制SIV作用,皂苷的效果優(yōu)于利巴韋林;(4)四種成分均有體外直接殺滅病毒作用,生物堿的作用優(yōu)于利巴韋林。苦參四種成分的最小有效劑量分布在0.1078μg/ml~19.2μg/ml之間,其中苦參黃酮的最小有效濃度最低;治療指數(shù)在32~128之間,皂苷成分的治療指數(shù)最高??鄥⒊煞峙c病毒同時(shí)接觸細(xì)胞時(shí),各成分均呈現(xiàn)出明

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