雙聯(lián)芐衍生物Riccardin d-26抗癌活性研究.pdf

1、RiccardinD-26是riccardinD的胺甲基化衍生物。RiccardinD是從苔蘚植物Dumortierahirsuta分離得到的大環(huán)雙聯(lián)芐化合物，研究證明riccardinD能在體外、體內抑制多種腫瘤細胞增殖并誘導凋亡，riccardinD能顯著降低APCmin+基因小鼠小腸息肉、腺瘤的數(shù)量，提示riccardinD在化學預防方面的作用。但riccardinD的水溶性小、生物利用度差，限制了其進一步應用。為改善其水溶性、增

2、強其生物學效應，我們在riccardinD結構的基礎合成了一系列胺甲基化、鹵化衍生物，并從中篩選得到riccardinD-26。
　　 在肝癌細胞中，以MTT法和克隆形成法證明riccardinD-26對多種肝癌細胞有明顯抑制作用，p53野生型肝癌細胞對riccardinD-26的敏感性高于p53蛋白降低型肝癌細胞，riccardinD-26對人正常肝細胞抑制作用較腫瘤細胞弱。在裸鼠荷瘤模型中，riccardinD-26顯著抑制

3、SMMC-7721的生長，且未觀察到明顯毒性反應。細胞周期分析顯示riccardinD-26能將SMMC-7721細胞阻滯在G1期。采用Hoechst33258染色、流式細胞術及westernblotting證明riccardinD-26可誘導細胞凋亡，表現(xiàn)為細胞核濃縮、邊緣化，Annexin+/PI+，caspase-9/3及PARP切割帶表達量上調。JC-1染色和線粒體/胞漿檢測cytochromec顯示線粒體膜電勢下降，cytoc

4、hromec釋放，Bax/Bcl-2比例上升，提示線粒體介導的凋亡通路被激活。RT-PCR顯示riccardinD-26誘導p53及其下游基因Bax、p21Waf1/Cip1轉錄激活;Westernblotting結果顯示riccardinD-26可誘導p53、Bax轉位到線粒體;免疫熒光染色顯示p53入核抑制劑PFT-α能抑制riccardinD-26引起的p53在核內積累;流式細胞術結果顯示p53線粒體轉位抑制劑PFT-μ能減輕ri

5、ccardinD-26引起的線粒體膜電勢降低。這些結果表明riccardinD-26通過p53介導的轉錄依賴性和轉錄非依賴性途徑誘導細胞凋亡。
　　 在多藥耐藥細胞KB/VCR及其親本細胞KB中，以MTT法和克隆形成法證明riccardinD-26能在體外顯著抑制兩種細胞的增殖，對KB/VCR和KB的抑制作用無明顯差異。在裸鼠荷瘤模型中，riccardinD-26可顯著抑制KB/VCR和KB移植瘤組織的生長，riccardinD

6、-26對KB/VCR瘤組織的生長抑制率比長春新堿更高，且毒性更低。以DAPI染色，AnnexinV/PI雙染和westernblotting方法證明riccardinD-26可以引起KB/VCR和KB細胞凋亡。應用TUNEL和westernblottin證明riccardinD-26可引起腫瘤組織的細胞凋亡。JC-1染色和線粒體/胞漿檢測cytochromec顯示線粒體膜電勢下降，cytochromec從線粒體釋放進入胞漿，Bax/Bc

7、l-2比例上升，提示線粒介導的凋亡通路的參與。采用westernblotting方法進一步分析顯示riccardinD-26以劑量依賴性的方式抑制細胞存活信號ERK、Akt的磷酸化，同時提高凋亡信號p38的磷酸化水平，對JNK的磷酸化水平影響則不明顯。上述結果表明riccardinD-26可能通過影響細胞存活通路ERK、Akt和凋亡通路p38來誘導耐藥細胞KB/VCR的凋亡，從而發(fā)揮抗多藥耐藥的作用。
　　 綜上所述，ricca