抗人乳腺癌重組免疫毒素M-,4-G-,3--ScFv-PE40的原核表達(dá)及活性研究.pdf

1、將已構(gòu)建好的抗人乳腺癌基因工程抗體免疫毒素M<,4>G<,3>/ScFv-PE40基因進(jìn)行原核表達(dá),并對(duì)誘導(dǎo)表達(dá)條件、表達(dá)量、包涵體的分離純化、溶解和復(fù)性進(jìn)行探索,得到重組蛋白M<,4>G<,3>/ScFv-PE40,Western blot證實(shí)其符合重組蛋白的結(jié)構(gòu)要求,進(jìn)而研究其對(duì)人乳腺癌細(xì)胞的靶向作用及其體外細(xì)胞殺傷活性,從而為乳腺癌的生物治療提供新的手段奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ).方法:1、表達(dá)體系的構(gòu)建:將M<,4>G<,3>/ScFv-PE

2、40用NcoⅠ、HindⅢ從T載體上雙酶切下來,與同樣雙酶切后的載體pET26b(+)相連,轉(zhuǎn)化克隆菌株DH5 α,酶切鑒定正確后轉(zhuǎn)化BL21(DE3)溶原菌;2、優(yōu)化表達(dá)目的蛋白及鑒定:以不同濃度的IPTG誘導(dǎo)ScFv-PE40表達(dá),做SDS-PAGE凝膠電泳分析其分子量大小、表達(dá)量,Western blot證實(shí)其符合重組蛋白的結(jié)構(gòu)要求;3、ScFv-PE40的復(fù)性:大量表達(dá)目的蛋白,進(jìn)行包涵體的分離純化、溶解和復(fù)性探索;4、ScFv