化合物RY10-4的合成優(yōu)化及抗乳腺癌活性研究.pdf

1、本論文對(duì)具有抗腫瘤活性的化合物RY10-4合成進(jìn)行了優(yōu)化，以及其在體外和體內(nèi)對(duì)乳腺癌MCF-7細(xì)胞的作用進(jìn)行了研究，并對(duì)RY10-4體內(nèi)抑制乳腺癌移植瘤生長(zhǎng)的可能作用機(jī)制作了探究。主要內(nèi)容包括兩部分：第一部分確定RY10-4的合成路線，優(yōu)化合成條件，以提高合成收率；第二部分在細(xì)胞水平研究了RY10-4對(duì)乳腺癌MCF-7細(xì)胞的作用；建立裸鼠移植瘤模型，研究其在體內(nèi)對(duì)乳腺癌的作用，并探究可能作用機(jī)制。
　　第一部分、RY10-4的合成

2、優(yōu)化研究
　　目的：確定2-(1-羥基-4-酮-2,5-環(huán)己二烯)-吡喃-4-酮（RY10-4）的合成反應(yīng)路線，提高合成收率，使RY10-4的合成得到優(yōu)化。
　　方法：設(shè)計(jì)RY10-4的合成路線，通過實(shí)驗(yàn)分析，并與已報(bào)道路線對(duì)比，確定反應(yīng)合成路線，優(yōu)化反應(yīng)路線中關(guān)鍵步驟反應(yīng)條件，提高反應(yīng)收率，并對(duì)中間體和目標(biāo)產(chǎn)物進(jìn)行結(jié)構(gòu)確證。
　　結(jié)果：通過對(duì)多條路線的試驗(yàn)和分析，確定以2-(2-溴乙基)-1,3-二氧戊環(huán)為起始反應(yīng)物

3、，經(jīng)取代、1,3-偶極環(huán)加成為異惡唑、開環(huán)、脫甲基、氧化等六步反應(yīng)合成RY10-4。成功確證合成線路中5個(gè)中間體和RY10-4的結(jié)構(gòu)；經(jīng)過HLPC檢測(cè)，RY10-4的純度為96.70％。重點(diǎn)優(yōu)化了第二步和第六步反應(yīng)的條件，使這兩步的收率分別提高到85%和38%。
　　結(jié)論：通過對(duì)各步反應(yīng)中間體及目標(biāo)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)確認(rèn)，確定了RY10-4的合成路線；通過對(duì)關(guān)鍵步驟的條件優(yōu)化，大幅度提高了RY10-4的合成收率。
　　第二部分、RY

4、10-4抗乳腺癌活性研究
　　目的：研究化合物RY10-4在體外對(duì)乳腺癌MCF-7細(xì)胞作用，探討RY10-4對(duì)乳腺癌MCF-7裸鼠移植瘤抑制作用及其可能的作用機(jī)制。
　　方法：通過MTT染色法，研究RY10-4在體外對(duì)乳腺癌（MCF-7）細(xì)胞的抑制作用；通過Annexin V/PI雙染法檢測(cè)，檢測(cè)RY10-4誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用。創(chuàng)建MCF-7細(xì)胞的裸鼠移植瘤模型，將造模裸鼠隨機(jī)分為模型組、RY10-4低劑量組(7.5mg·k

5、g-1)、RY10-4高劑量組(15mg·kg-1)和紫杉醇組(15mg·kg-1)；各組均采取隔天腹腔注射給藥，并檢測(cè)各組荷瘤裸鼠移植瘤體積和體重變化。給藥16 d后，處死所有裸鼠，稱取各組移植瘤質(zhì)量，TUNEL法檢測(cè)各組移植瘤凋亡指數(shù)，并通過Western blot測(cè)定移植瘤中Bcl-2、Bax和MAPK通路蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：RY10-4可顯著抑制MCF-7細(xì)胞的增殖，且能明顯誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡。與模型組比較，RY10-4

6、低、高治療組和紫杉醇組瘤體積明顯減小，瘤質(zhì)量明顯減輕，抑瘤率分別為29.8%，47.2%，53.8%。TUNEL法結(jié)果顯示，各治療組能明顯引起移植瘤細(xì)胞凋亡(P<0.01)。Western blot結(jié)果顯示，隨著RY10-4治療量的增加抗凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)下調(diào)，促凋亡蛋白 Bax的表達(dá)增加，Bcl-2/Bax值顯著下降，與模型組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)的意義；另外，RY10-4治療組移植瘤細(xì)胞中的p-p38和p-ERK表達(dá)量明顯增加。