抗人腦膠質(zhì)瘤重組免疫毒素SZ39（ScFv）-PE40及人源化抗CD3單鏈抗體在大腸桿菌中的表達(dá).pdf

1、　　本文在已經(jīng)克隆并表達(dá)了抗人腦膠質(zhì)瘤單鏈抗體SZ39-ScFv的基礎(chǔ)上，構(gòu)建了抗人腦膠質(zhì)瘤重組免疫毒素SZ39(ScFv)-PE40，并在大腸桿菌中得到了高效的表達(dá)，初步證實(shí)其具有結(jié)合膠質(zhì)瘤細(xì)胞SHG-44的活性，為進(jìn)一步研究開發(fā)抗膠質(zhì)瘤重組免疫毒素打下了基礎(chǔ)；另外，本研究還構(gòu)建并原核表達(dá)了人源化抗CD3單鏈抗體，為進(jìn)一步構(gòu)建抗CD3/抗膠質(zhì)瘤雙特異性抗體作了必要的準(zhǔn)備工作?！　”疚牡谝徊糠盅芯苛巳嗽椿笴D3單鏈抗體的構(gòu)建和表達(dá)。

2、從質(zhì)粒pZZ3中克隆出人源化抗CD3抗體的VH、VL基因，并經(jīng)測序證實(shí)；利用克隆出的VH、VL基因構(gòu)建人源化抗CD3單鏈抗體基因，分別將其克隆入大腸桿菌融合表達(dá)載體pGEX-5X-1及分泌型表達(dá)載體pET20b(+)中，并分別轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)及BL21(DE3)pLysS。 本文第二部分抗人腦膠質(zhì)瘤重組免疫毒素SZ39(ScFv)-PE40的基因構(gòu)建及表達(dá)從質(zhì)粒pVC85中克隆出PE40基因，與抗膠質(zhì)瘤單鏈抗體SZ

3、39-ScFv基因進(jìn)行拼接，構(gòu)建出重組免疫毒素SZ39(ScFv)-PE40基因。 本文第三部分重組免疫毒素SZ39(ScFv)-PE40在大腸桿菌中的GST融合表達(dá)。將已構(gòu)建的SZ39(ScFv)-PE40基因克隆入大腸桿菌GST融合表達(dá)載體pGEX-5X-1中，并在大腸桿菌BL21(DE3)中以IPTG誘導(dǎo)表達(dá)。 本文第四部分重組免疫毒素SZ39(ScFv)-PE40的分離純化、變性及復(fù)性的初步研究?！　∫陨系难芯?/p>