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1、 目的:通過用異型雙功能化學(xué)偶聯(lián)劑MBS作為兩種蛋白間的連接劑,制備新型免疫毒素VEGF IgG-CRM9,為腫瘤靶向治療奠定基礎(chǔ)。 方法:分別應(yīng)用雙功能連接劑MBS和N-琥珀酰亞胺3-(2-吡啶二巰基)丙酸鹽(SPDP)將兔抗人IgG和白喉毒素突變體(CRM9)進行連接,制備新型偶聯(lián)蛋白的預(yù)試驗。結(jié)合后的蛋白經(jīng)Sephacryl S-300分離純化后,用聚丙烯酰胺凝膠電泳和瓊脂糖電泳證明二者的結(jié)合情況。采用酶聯(lián)免疫法檢測Ig
2、G與CRM9按不同比例反應(yīng)后所構(gòu)建的蛋白復(fù)合體中抗體部分的活性。根據(jù)預(yù)試驗的結(jié)果,采用MBS作為偶聯(lián)劑,兩種蛋白的比例為1:1制備免疫毒素VEGF IgG-CRM9,并通過聚丙烯酰胺凝膠電泳來驗證兩種蛋白的結(jié)合情況。用雞胚絨毛尿囊膜(CAM)技術(shù)來檢測VEGF IgG-CRM9的抗血管作用,并間接證明抗體的活性,采用MTT細(xì)胞毒性試驗檢測VEGF IgG-CRM9的抗體導(dǎo)向作用及毒素部分的活性。 結(jié)論:IgG與CRM9可以通過MB
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