MicroRNA150在氧化型低密度脂蛋白誘導的THP-1源性巨噬細胞凋亡中的作用及機制.pdf

1、動脈粥樣硬化斑塊內(nèi)巨噬細胞凋亡是易損斑塊形成的重要原因，體內(nèi)脂質(zhì)過氧化形成的氧化型低密度脂蛋白是引起巨噬細胞凋亡的明確因素。斑塊內(nèi)增加的巨噬細胞P53表達與巨噬細胞凋亡及斑塊穩(wěn)定性密切相關。MicroRNA通過在轉(zhuǎn)錄后水平負調(diào)節(jié)基因的表達調(diào)控細胞的凋亡。MicroRNA150在惡性淋巴瘤中能降低P53的表達。本實驗主要從以下三個部分探討MicroRNA150在氧化型低密度脂蛋白誘導的THP-1源性巨噬細胞的凋亡中的作用及其機制。

2、　　 第一部分 MicroRNA150在氧化型低密度脂蛋白誘導的THP-1源性巨噬細胞中的表達及其相關性研究
　　 目的：觀察MicroRNA150在氧化型低密度脂蛋白誘導的THP-1源性巨噬細胞的表達，并初步探討其相關性。
　　 方法：以不同濃度的氧化型低密度脂蛋白（0，25，50，75，100mg/l）刺激THP-1源性的巨噬細胞，24小時，48小時CCK8檢測細胞活性，48小時流式細胞儀檢測細胞凋亡情況，實時熒光

3、定量RT-PCR檢測各組細胞中MicroRNA150的表達情況。
　　 結(jié)果：⑴氧化型低密度脂蛋白作用后，THP-1源性巨噬細胞的細胞活性下降，凋亡率升高，呈劑量依賴型（p<0.01）MicroRNA150 表達下調(diào)（P<0.01），也呈劑量依賴型。
　　 結(jié)論：氧化型低密度能誘導THP-1源性巨噬細胞凋亡，其機制可能與下調(diào)MicroRNA150的表達相關。
　　 第二部分 瞬時轉(zhuǎn)染MicroRNA150mimi

4、cs觀察MicroRNA150對氧化型低密度脂蛋白誘導的THP-1源性巨噬細胞凋亡的影響
　　 目的：通過轉(zhuǎn)染MicroRNA150mimics，使細胞過表達MicroRNA150，進一步探討MicroRNA150在氧化型低密度脂蛋白誘導的THP-1源性巨噬細胞凋亡中的作用。
　　 方法；應用Lipofectine2000將MicroRNA150mimics轉(zhuǎn)染入THP-1源性巨噬細胞，24小時后以不同濃度（0，25，5

5、0，75，100mg）氧化型低密度脂蛋白刺激轉(zhuǎn)染組，陰性對照組及空白組48小時，CCK8法檢測轉(zhuǎn)染后細胞的活性，流式細胞儀檢測細胞凋亡情況，實時熒光定量RT-PCR檢測各組細胞中MicroRNA150的表達情況。
　　 結(jié)果：
　　 ⑴轉(zhuǎn)染組MicroRNA150表達較空白組，陰性對照組細胞明顯增加（P<0.01）
　　 ⑵轉(zhuǎn)染組的細胞活性抑制率，凋亡率較空白組，陰性對照組細胞明顯下降，凋亡降低。（P 均<0.0

6、1）。
　　 結(jié)論：MicroRNA150在氧化型低密度脂蛋白誘導的THP-1源性巨噬細胞凋亡中有抗凋亡作用。
　　 第三部分 MicroRNA150抗氧化型低密度脂蛋白誘導的THP-1源性巨噬細胞凋亡的可能的作用機制
　　 目的：探討MicroRNA150的是否通過負調(diào)節(jié)P53mRNA起作用。
　　 方法：挑選第二章中轉(zhuǎn)染組，陰性對照組，空白對照組中兩組濃度的細胞（0，50mg），熒光實時RT-PCR檢