哮喘患者T細胞周期分布的調(diào)控機制及PS干預的意義.pdf

1、　　目的：
　　(1)探討哮喘患者T細胞及其亞群CD4+T、CD8+T細胞周期分布規(guī)律及其調(diào)控機制,從細胞周期及其調(diào)節(jié)蛋白水平揭示發(fā)作期哮喘患者T細胞過度活化、增殖的機制。(2)利用細胞培養(yǎng)技術,通過肺表面活性物質(zhì)(pulmonary surfactant, PS)干預,分析PS對哮喘患者和正常人CD4+T、CD8+T細胞的細胞周期分布和細胞周期調(diào)節(jié)蛋白(cell cycle regulatory proteins, CCRP)表

2、達水平的影響,探討“靶位”干預在哮喘治療中的意義。
　　方法：
　　(1)哮喘組和對照組各30例,取外周靜脈血6ml、EDTA抗凝,分為2管,淋巴細胞分離液分離外周血單個核細胞(PBMC),尼龍棉柱分離法分離T淋巴細胞,補體介導的細胞毒分離法分離CD4+T、CD8+T細胞。(2)用流式細胞儀,采用碘化丙啶DNA染色法,進行DNA含量測定,根據(jù)DNA含量倍體分布,分析細胞周期各時相T細胞及其亞群CD4+T、CD8+T的百分率；

3、用流式細胞儀、間接免疫熒光法,測定T細胞、CD4+T、CD8+T細胞內(nèi)P27kipl、cyclin E、cyclin A、cyclin B的表達。比較兩組的差異,探討哮喘患者T細胞及其亞群CD4+T、CD8+T細胞的細胞周期分布規(guī)律及其調(diào)控機制。(3)CD4+T、CD8+T細胞分別與PS、磷酸鹽緩沖液(PBS)進行體外培養(yǎng),分析PS干預對CD4+T、CD8+T細胞周期分布和細胞內(nèi)P27kipl、cyclin E、cyclin A、cyc

4、lin B表達的影響。
　　結(jié)果：
　　(1)哮喘組處于DNA合成的S期和細胞分裂的G2/M期T細胞比例較對照組顯著增加,處于相對靜止狀態(tài)的G0/G1期T細胞比例較對照組明顯減少。(2)哮喘組CD4+T細胞處于DNA合成期和細胞分裂期的比例較對照組顯著增加。(3)哮喘組CD8+T細胞處于DNA合成期的細胞比例顯著高于對照組,細胞分裂期的細胞比例與對照組比較差異無顯著性。(4)哮喘組T細胞及CD4+T細胞內(nèi)G1/S、G2/M限

5、制點的正性CCRP cyclin E、cyclin A、cyclin B的表達顯著高于對驢夢吵鄂憋。。一蘭照組,而負性cc即P27kiP,的表達則低于對照組；cDS+T細胞內(nèi)Gl/s限制點的正性cc即cyclinE的表達顯著高于對照組,而負性ccRP PZ戶Pl的表達則低于對照組,q從限制點的正性CCRP cyclinB的表達與對照組比較差異無顯著性；哮喘組T、en4+T、ens+T細胞內(nèi)P27k‘p,與cyel訊E的比值均顯著低于對照

6、組。(5) PS可下CD4+T細胞內(nèi)GI/s、q脫限制點的正性CCRP的表達和上調(diào)其負性CCRP的表達,抑制CD4+T細胞的DNA合成和細胞分裂。(6)PS下調(diào)CDS+T細胞內(nèi)Gl/s限制點的正性CC即的表達和上調(diào)其負性CC即的表達,抑制CDS+T細胞的DNA合成,而對CDS+T細胞的細胞分裂影響較小,且PS對CDS+T細胞內(nèi)cyclinB表達的抑制作用也較弱。
　　結(jié)論：
　　(1)哮喘患者與正常人相比較,T細胞及其亞群C

7、D4+T、CDS+T細胞周期分布存在明顯差異,哮喘患者處于增殖分裂狀態(tài)的細胞比例顯著增加,正常人以處于相對靜止狀態(tài)的細胞為主。(2)哮喘患者T細胞及CD4+T細胞增殖活化的機制與細胞內(nèi)Gl/s、q艦限制點的正性CCRP的表達上調(diào)和負性CCRP的表達下調(diào)有關；cyclinB在CDS+T細胞分裂中起重要作用,其處于細胞分裂期的細胞比例與cydinB的表達水平密切相關；哮喘患者T細胞內(nèi)P27k幣1與cyclinE的比值失衡在細胞周期進程中可能