阻斷PD-1-PD-L1信號通路對負(fù)載HBsAg的DC疫苗抗HBV免疫功能的影響.pdf

1、目的: 阻斷PD-1/PD-L1信號通路后，觀察HBsAg沖擊的DC疫苗誘導(dǎo)HBV轉(zhuǎn)基因小鼠抗HBV作用特點(diǎn)及對HBV持續(xù)感染的可能治療作用。 方法: 細(xì)胞因子體外誘導(dǎo)擴(kuò)增BALB/c小鼠骨髓來源的DC，流式細(xì)胞術(shù)觀察表面CD11c、CD40、CD80及CD86共刺激分子表達(dá)情況。尾靜脈免疫HBV轉(zhuǎn)基因小鼠(其中在DC免疫前1天腹腔注射PD-L1抗體，共3次)。分別以流式細(xì)胞術(shù)、乳酸脫氫酶(LDH)釋放實(shí)驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(E

2、LISA)、熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(FQ-PCR)等分別檢測HBV轉(zhuǎn)基因小鼠脾內(nèi)CD8+T淋巴細(xì)胞增殖及胞內(nèi)IFN-γ、細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)活性、血清HBsAg、HBV DNA水平和丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)水平，普通HE染色觀察肝臟組織炎癥情況。 結(jié)果: 骨髓細(xì)胞來源的DC培養(yǎng)到第8天，流式細(xì)胞術(shù)檢測發(fā)現(xiàn)90％以上的細(xì)胞表面表達(dá)CD11c、CD40、CD80及CD86共刺激分子，HBsAg刺激前后以上各分子表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)

3、學(xué)意義(P>0.05)。免疫后第3～6天，DC/HBsAg+PD-L1抗體組(即聯(lián)合組)較DC/HBsAg和DC組誘導(dǎo)明顯的CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞增殖及IFN-γ分泌能力。與其他各組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而DC/HBsAg組和DC組CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞增殖能力比較僅在第6天有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，IFN-γ的分泌能力無差別。HBV特異性CTL活性在聯(lián)合組顯著增強(qiáng)，與DC/HBsAg組比較差異不顯著，但與其

4、他組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.01)。聯(lián)合組血清HBsAg在第3天與DC/HBsAg組比較無差別(與DC組、mIgG組及PBS組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05)，但第6天血清HBsAg在聯(lián)合組明顯降低(與其他組比較均P<0.05)，其次下降較明顯的是DC/HBsAg組和DC組。血清ALT在聯(lián)合組升高為著(vs DC/HBsAg組，P<0.05；vs 其他組均P<0.01)，而DC/HBsAg組和DC組在第6天比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意

5、義。雖然聯(lián)合組有1只Tg小鼠病毒量下降1個(gè)數(shù)量級(FQ-PCR法)，而各組對HBV DNA的清除能力沒有差別。肝臟組織學(xué)在聯(lián)合組、DC/HBsAg組及DC組僅在匯管區(qū)或肝內(nèi)有輕微的炎癥細(xì)胞浸潤，但各組變化無差別。 結(jié)論 1.阻斷PD-1/PD-L1信號通路后，HBsAg負(fù)載的DC能夠誘導(dǎo)HBV轉(zhuǎn)基因小鼠脾臟更強(qiáng)的CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞增殖能力。 2.阻斷PD-1/PD-L1信號通路后能夠促進(jìn)HBsAg負(fù)載的D