雞MMP-13基因的表達(dá)特征及遺傳學(xué)效應(yīng)研究.pdf

1、雞的卵巢卵泡生長(zhǎng)發(fā)育過程中，細(xì)胞外基質(zhì)（Extracelluar matrix,ECM）經(jīng)歷連續(xù)的組織降解和重塑，基質(zhì)金屬蛋白酶（Matrix metalloproteinases,MMPs)及其組織抑制劑（tissue inhibitors of matrix metalloproteinase,TIMPs）協(xié)同作用以調(diào)節(jié)細(xì)胞與細(xì)胞之間、細(xì)胞與基質(zhì)之間的相互作用。MMP-13，亦稱膠原酶-3，可降解間質(zhì)膠原、IV和IX型膠原酶及多種E

2、CM成分。本研究對(duì)MMP-13在雞卵泡發(fā)育過程中的作用及其與產(chǎn)蛋性狀的關(guān)系進(jìn)行了分析。結(jié)果如下：
　　1．qRT-PCR和Western blotting結(jié)果顯示：MMP-13在未開產(chǎn)雞卵巢中的表達(dá)較低，隨著年齡增長(zhǎng)，在開產(chǎn)雞卵巢中表達(dá)極顯著升高（P<0.05）。在開產(chǎn)后雞的不同等級(jí)卵泡中，MMP-13的mRNA表達(dá)從SW（the small white follicle）到F5（the fifth large follicle）

3、升高，然后下降至F1（the first large follicle），在POF1（the first post-ovulatory follicle）中的表達(dá)又極顯著升高（P<0.01）。蛋白表達(dá)趨勢(shì)同mRNA基本一致，但差異不顯著（P>0.05）。
　　2．免疫組化檢測(cè)結(jié)果顯示，MMP-13蛋白在未開產(chǎn)雞（45d）卵巢膜細(xì)胞，卵母細(xì)胞內(nèi)、間質(zhì)細(xì)胞和顆粒細(xì)胞均檢測(cè)到信號(hào)，在性成熟雞卵巢的膜細(xì)胞層表達(dá)較高，且分布在血管周圍。

4、r>　　3．本研究進(jìn)一步分析了 MMP-13基因5′調(diào)控區(qū)的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制，雙熒光素酶活性分析結(jié)果表明–1863 bp至–1036 bp為關(guān)鍵啟動(dòng)子區(qū)；并在此區(qū)段檢測(cè)到6個(gè)SNP位點(diǎn)，在不同雞群中的基因型分布有差別。與隱性白洛克雞群體產(chǎn)蛋性狀的關(guān)聯(lián)分析結(jié)果表明，A–1356-C–1079基因型的母雞的開產(chǎn)日齡早于G–1356-T–1079基因型個(gè)體（P<0.05）。
　　4.進(jìn)一步構(gòu)建了不同基因型載體，轉(zhuǎn)染雞膜細(xì)胞后，檢測(cè)雙熒光素酶

5、的活性。結(jié)果顯示，A–1356-C–1079基因型的活性低于G–1356-T–1079基因型（P<0.01）。應(yīng)用生物信息學(xué)在線軟件（http://www.genomatix.de/index.html），預(yù)測(cè)到在-1356、-1128和-1094位點(diǎn)分別有MELS、KLF7和Grhl2轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合位點(diǎn)。
　　總之，我們目前的研究結(jié)果表明：MMP-13在雞卵泡生長(zhǎng)和POF退化過程中起著重要作用，其啟動(dòng)子區(qū)的多態(tài)位點(diǎn)可以作為雞育種