THAP11與ABRO1相互作用及其介導(dǎo)的生物學(xué)功能研究.pdf

1、蛋白質(zhì)相互作用是蛋白質(zhì)發(fā)揮生物學(xué)功能的重要基礎(chǔ)，研究蛋白質(zhì)相互作用可以提供目標(biāo)蛋白質(zhì)的功能線索，還可望揭示蛋白質(zhì)的分子作用機(jī)制。THAP11是THAP蛋白家族的成員之一，是一種鋅離子依賴的轉(zhuǎn)錄因子，參與細(xì)胞凋亡、增殖調(diào)控，但其功能和作用機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。ABRO1(Abraxas Brother1)也被稱為KIAA0157或者FAM175B，作為支架蛋白能夠介導(dǎo)BRISC去泛素化酶復(fù)合體的形成，是該復(fù)合體發(fā)揮去泛素化酶催化活性所必需

2、的成分。此外，ABRO1能與THAP5、AP-1蛋白家族結(jié)合，參與細(xì)胞氧化應(yīng)激反應(yīng)。目前，對(duì)ABRO1的研究還處于起步階段，其功能和作用機(jī)制尚待深入研究。
　　為深入研究這兩種蛋白質(zhì)及其介導(dǎo)的生物學(xué)功能，我們以其相互作用為切入點(diǎn)，首先利用免疫沉淀技術(shù)，確定了THAP11與ABRO1存在相互作用，并鑒定了介導(dǎo)相互作用的結(jié)構(gòu)域，進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)ABRO1在正常條件下主要分布于細(xì)胞質(zhì)，少量分布于細(xì)胞核，與THAP11存在弱的共定位，但在DNA

3、損傷時(shí)ABRO1能夠入核并與THAP11形成明顯的共定位。DNA損傷明顯上調(diào)ABRO1和THAP11的表達(dá)，這個(gè)過程不依賴于p53。本實(shí)驗(yàn)室研究發(fā)現(xiàn)ABRO1是一種重要的DNA損傷反應(yīng)調(diào)控基因（未發(fā)表結(jié)果），提示THAP11可能參與DNA損傷調(diào)控。為證明這個(gè)假設(shè)，我們檢測(cè)了正常情況和DNA損傷時(shí)THAP11對(duì)細(xì)胞周期和凋亡的影響，發(fā)現(xiàn)過表達(dá)THAP11能促進(jìn)細(xì)胞凋亡，使細(xì)胞G2期發(fā)生阻滯，DNA損傷時(shí)，G0/G1期發(fā)生阻滯，過表達(dá)THA

4、P11使G0/G1期阻滯更加明顯。
　　我們實(shí)驗(yàn)室前期的研究發(fā)現(xiàn)ABRO能與p53相互作用并增強(qiáng)p53蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性?；赥HAP11能與ABRO1相互作用且參與細(xì)胞DNA損傷反應(yīng)調(diào)節(jié)，我們檢測(cè)了THAP11與p53的相互作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)THAP11確能與p53發(fā)生相互作用，并通過抑制p53的泛素化修飾穩(wěn)定p53蛋白。雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)發(fā)現(xiàn)THAP11對(duì)p53下游靶基因MDM2和p21的轉(zhuǎn)錄活性有影響。
　　本論文通過研究