smn-1與uaf-1相互作用調(diào)節(jié)線蟲壽命與運(yùn)動功能.pdf

1、脊髓性肌萎縮癥(Spinal Muscular Atrophy, SMA)是最常見的致死性神經(jīng)肌肉疾病，由運(yùn)動神經(jīng)元生存基因SMN1(Survival MotorNeuron1)的功能缺失型突變引起，其具體機(jī)制尚不清楚。有研究表明，SMN1影響U snRNP(small nuclear RiboNucleoProtein)的組裝，U snRNP是執(zhí)行RNA剪接的主要分子復(fù)合物，RNA剪接缺陷可能是造成SMA的原因。
　　目的:

2、r>　　研究SMN1的秀麗隱桿線蟲同源基因smn-1在RNA剪接中的功能以及smn-1與識別3'剪接位點(diǎn)的重要剪接因子uaf-1的相互作用。
　　方法:
　　1.tos-1是一個敏感的線蟲內(nèi)源性剪接報告基因。我們利用RT-PCR檢測了smn-1的無效突變smn-1(ok355△)對tos-1剪接的影響，并通過RNAi減少smn-1的表達(dá)，確認(rèn)tos-1的剪接變化。同時，利用tos-13'剪接位點(diǎn)突變質(zhì)粒注射產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因的smn

3、-1(ok355△)線蟲，研究強(qiáng)3'剪接位點(diǎn)的識別是否需要smn-1。
　　2.smn-1(ok355△)線蟲發(fā)育停滯在幼蟲晚期，壽命縮短，并伴有運(yùn)動缺陷。為了分析smn-1與uaf-1的相互作用，我們檢測了相關(guān)線蟲的壽命和三個運(yùn)動指標(biāo)，包括bodybends、thrashing和咽部pumping。
　　3.U snRNA是U snRNP的核心組分，參與RNA剪接的U snRNA有五種，分別為U1、U2、U4、U5和U6

4、snRNA。因此我們利用RT-qPCR檢測了smn-1(ok355△)突變體中U snRNA的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.smn-1(ok355△)突變改變tos-1的剪接，tos-1中弱3'剪接位點(diǎn)的識別需要smn-1，弱3'剪接位點(diǎn)的識別不需要smn-1。
　　2.uaf-1突變延長smn-1(ok355△)突變體的壽命并改善其運(yùn)動功能。
　　3.在smn-1(ok355△)突變體中，我們檢測到U1和U5 s