大鼠嗅鞘細(xì)胞的純化及活性檢測.pdf

1、目的：1.采用改良差速貼壁聯(lián)合胰酶限時消化法純化大鼠嗅鞘細(xì)胞并檢測嗅鞘細(xì)胞純度。2.檢測上述純化方法所得嗅鞘細(xì)胞的生物活性。
　　方法：分離新生7d的SD大鼠嗅球嗅鞘細(xì)胞，分組后采用改良差速貼壁法聯(lián)合不同時段（1min﹑3min﹑5min）胰酶消化法純化培養(yǎng)，觀察不同時段純化的嗅鞘細(xì)胞的形態(tài)特點及生長情況；應(yīng)用免疫熒光法檢測細(xì)胞膜受體NGFRP75并評估細(xì)胞純度；應(yīng)用CCK-8法和酶聯(lián)免疫吸附法分別檢測嗅鞘細(xì)胞在純化后3d-15d

2、的增殖活性和分泌腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子的含量。
　　結(jié)果：改良差速貼壁聯(lián)合胰酶限時消化1min﹑3min﹑5min法所得嗅鞘細(xì)胞純度分別為（57.52±2.13）％、（78.95±2.60）%、（49.01±0.74）%，組間兩兩比較有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；改良差速貼壁法聯(lián)合胰酶限時消化1min﹑3min﹑5min法所得嗅鞘細(xì)胞在純化后7d﹑9d﹑11d時的細(xì)胞數(shù)目和腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子分泌量顯示3min組最優(yōu)，組間比較有統(tǒng)計學(xué)意