構建假單胞菌突變株M18GQ攜帶重組質粒pME6032Phz的工程菌株及響應面法優(yōu)化吩嗪-1-羧酸發(fā)酵條件的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、假單胞菌M18(Pseudomonas sp. M18)分離自上海郊區(qū)甜瓜根際,能夠分泌具有廣譜抑制真菌活性的次生代謝產物吩嗪-1-羧酸(phenazine-1-carboxylic acid, PCA),是一株具有生物防治功能的新型菌株。本研究構建了M18菌株phz基因簇的過表達重組質粒pME6032Phz,并將其導入M18野生株及其突變株中,結果表明攜帶重組質粒后各菌株的PCA產量都有一定的提高。其中,M18GQ/pME6032Ph

2、z菌株——染色體上gacA/qscR雙突變株M18GQ攜帶重組質粒pME6032Phz——具有最高的PCA產量。為發(fā)掘M18GQ/pME6032Phz工程菌株高產PCA的潛能,進一步開展該菌株的培養(yǎng)基優(yōu)化研究。在搖瓶實驗中,首先運用單因子實驗方法對其發(fā)酵條件進行初篩,確定IPTG(isopropyl-β-D-1-thiogalactopyranoside)誘導的最優(yōu)條件。繼后,通過部分因子設計( fractional factorial

3、 design, FFD )確定影響M18GQ/pME6032Phz菌株發(fā)酵生產PCA的最顯著因素為：黃豆粉、玉米漿和乙醇。隨后通過最陡爬坡實驗和基于中心組合實驗(center compositedesign, CCD)的響應面方法(response surface methodology, RSM),研究了這些因子的相互作用關系,并確定了最優(yōu)濃度。優(yōu)化后的發(fā)酵培養(yǎng)基配方為黃豆粉65.02 g/l,玉米漿15.36 g/l,葡萄糖12

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