重組畢赤酵母產(chǎn)PGA高密度發(fā)酵及其固定化.pdf

1、青霉素G酰化酶是用于抗生素中間體6-氨基頭孢烷酸(6-APA)和7-氨基脫乙酰頭孢烷酸(7-ADCA)生產(chǎn)的重要酶制劑。青霉素G酰化酶能于酸性環(huán)境下催化D-氨基酸類似物與β-內(nèi)酰胺母核縮合反應，生成新的β-內(nèi)酰胺抗生素。該酶的大量生產(chǎn)和使用在青霉素和頭孢菌類抗生素的廣泛使用和低廉價格方面具有重要意義。酶法合成的優(yōu)點包括反應絕對專一性、避免環(huán)境污染、反應條件溫和、生產(chǎn)成本降低等。因此利用微生物發(fā)酵產(chǎn)青霉素G?；福瑢Λ@得完整發(fā)酵工藝有著積

2、極的現(xiàn)實意義。主要研究結(jié)果如下:
　　 發(fā)酵條件優(yōu)化:通過單因素試驗確定得到重組畢赤酵母產(chǎn)青霉素G?；缸钸m條件:甘油濃度40g/L、氨水濃度0.1％、甲醇濃度1.0％、pH5.5、接種量10％。運用Box-BehnkenDesign考察重組畢赤酵母產(chǎn)青霉素G?；傅陌l(fā)酵條件優(yōu)化，響應面分析確定得到二次多項回歸方程擬合程度良好，該模型R2=0.9813，優(yōu)化過后酶活可達到8680±12U/L。
　　 發(fā)酵動力學模型建立:

3、利用5L發(fā)酵罐對重組畢赤酵母產(chǎn)青霉素G?；傅陌l(fā)酵過程進行放大，發(fā)酵液青霉素G?；富盍蛇_到46345U/L。根據(jù)該菌株于5L發(fā)酵罐中不同階段的生長和產(chǎn)物形成動力學和發(fā)酵實驗數(shù)據(jù)進行分析的基礎上，應用Matlab工具軟件進行曲線擬合，建立了較為合理的重組畢赤酵母分批補料發(fā)酵生產(chǎn)青霉素G?；傅木w生長、青霉素G酰化酶合成以及基質(zhì)消耗動力學模型。所建模型能夠較好描述菌株發(fā)酵產(chǎn)青霉素G?；傅膭討B(tài)過程，能夠為后續(xù)的進一步放大試驗提供參考。

4、
　　 酶的分離純化:依次采用超濾濃縮，硫酸銨純化，酶液超濾脫鹽等方法對來源于重組畢赤酵母產(chǎn)青霉素G?；高M行純化，得到純度較高的青霉素G?；浮Ｇ嗝顾谿?；复置敢航?jīng)過，比活力達到31.3U/mg，純度提高6.38倍，回收率為49.78％。
　　 青霉素G?；傅墓潭ɑ?通過參閱文獻和實驗比較，篩選青霉素G?；傅墓潭ɑd體。探討了LX-1000EP-2樹脂固定化青霉素G酰化酶的工藝條件。試驗采用單因素試驗和Box-B