貝伐單抗-PLGA緩釋微球兔眼玻璃體腔注射的藥代動(dòng)力學(xué)及藥物分布研究.pdf

1、目的：向兔眼玻璃體腔注射貝伐單抗-PLGA緩釋微球，研究其在兔眼內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)及組織分布，評(píng)價(jià)該劑型眼內(nèi)應(yīng)用的安全性及應(yīng)用前景，為臨床應(yīng)用提供依據(jù)。
　　 方法：15只健康新西蘭大白兔，不分雌雄，左眼注射貝伐單抗-PLGA緩釋微球混懸液(約含貝伐單抗1.25mg)，右眼注射貝伐單抗注射液0.05ml(含貝伐單抗1.25mg)，注藥前后，裂隙燈顯微鏡及直接檢眼鏡觀察眼前節(jié)及眼底。分別于注藥后3d，7d，14d，28d，42d隨機(jī)選取

2、3只兔子，抽取雙眼的房水和玻璃體各0.05ml，后摘除雙眼眼球固定于10％中性甲醛溶液中。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)各樣本中貝伐單抗的濃度，應(yīng)用3p97軟件計(jì)算藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，采用t檢驗(yàn)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析；石蠟切片行熒光免疫染色觀察藥物在組織中的分布。
　　 結(jié)果：
　　 1．裂隙燈及眼底鏡檢查：術(shù)后所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物全身狀態(tài)良好，未見(jiàn)眼部感染、角膜混濁、白內(nèi)障、玻璃體混濁及眼底出血等并發(fā)癥。
　　 2．藥代

3、動(dòng)力學(xué)參數(shù)：注射貝伐單抗-PLGA緩釋微球混懸液(約含貝伐單抗1.25mg)的左眼與注射貝伐單抗注射液的右眼玻璃體腔內(nèi)平均藥物濃度比較：于注藥后3d分別為(249±0.13)μg/ml和(156±0.20)μg/ml;注藥后28d為左眼(45±0.14)μg/ml較右眼的（20±0.23）μg/ml高出約一倍，而注藥后42d左眼（14±0.22）μg/ml為右眼的4倍（3.6±0.19）μg/ml;左右眼房水中的平均藥物濃度于注藥后3d

4、分別為（19±0.22）μg/ml和（16±0.17）μg/ml;注藥后14d，平均濃度分別下降為(8±0.17)μg/ml和（2.3±0.04）μg/ml，術(shù)后42d左右眼濃度則分別降至（1.2±0.03）μg/ml和（0.3±0.04）μg/ml。貝伐單抗在左眼玻璃體內(nèi)藥物半衰期為9.6d，右眼為3.91d;在左眼房水中為10.2d，右眼為4.1d。左眼與右眼玻璃體及房水內(nèi)的藥物濃度的比較，差別均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.05。緩釋劑

5、型的AUC0-t為注射劑型的2倍(P＜0.05)，生物利用度Fr顯著提高。
　　 3．熒光免疫組化染色：術(shù)后雙眼視網(wǎng)膜、脈絡(luò)膜、虹膜睫狀體、房角等組織均可見(jiàn)藥物分布，且血管化組織分布明顯，術(shù)后3d、7d雙眼熒光閃亮，記錄為(+++)，隨時(shí)間推移，左眼術(shù)后14d、28d可見(jiàn)明亮熒光(++)，到術(shù)后42d仍可見(jiàn)較弱熒光(+)；右眼14d明亮熒光(++)，但較左眼弱，28d僅見(jiàn)微弱熒光(+)，42d熒光不可見(jiàn)（一）。
　　 結(jié)

6、論：玻璃體內(nèi)注射貝伐單抗-PLGA緩釋微球(約含貝伐單抗1.25mg)，通過(guò)組織形態(tài)學(xué)觀察，初步證明該緩釋劑型對(duì)兔眼視網(wǎng)膜無(wú)明顯毒性，該劑型的進(jìn)一步研發(fā)仍需電鏡觀察視網(wǎng)膜細(xì)胞，視網(wǎng)膜電圖檢測(cè)視網(wǎng)膜功能來(lái)驗(yàn)證其安全性。緩釋微球釋放的貝伐單抗在眼組織中的滲透及分布與溶液劑型未見(jiàn)明顯差別，但在注藥后14d、28d均可見(jiàn)注射緩釋微球眼的免疫熒光強(qiáng)度較對(duì)側(cè)眼強(qiáng)，且42d仍可見(jiàn)微弱熒光，提示該劑型緩慢釋放出游離的貝伐單抗并與眼內(nèi)VEGF結(jié)合，作用時(shí)