異質性胞核核糖核蛋白A2、I（hnRNPA2、Ⅰ）和趨化因子受體3（CXCR3）在風濕性疾病中的臨床研究.pdf

1、研究背景: 異質性胞核核糖核蛋白(hnRNP)是mRNA加工成熟過程中重要的核酸結合蛋白，也是風濕性疾病中免疫應答的靶抗原?？筯rIRNP抗體具有疾病特異性。類風濕關節(jié)炎(RA)患者血清中的抗hnRNP抗體主要是能與hnRNPA2特異性結合的抗體，該抗體又稱抗RA33抗體。抗hnRNPA2/RA33抗體不僅是風濕性疾病有價值的診斷指標，而且在其發(fā)病機理的研究中也具有重要意義。 研究目的及方法:以Ehrlich腹水癌細胞核

2、提取物作粗抗原，采用肝素-瓊脂糖凝膠CL-6B層析柱對此粗抗原進行分離半純化，并對hnRNPA2進行了基因的克隆、重組蛋白的表達和純化。以此抗原對臨床上包括137例RA在內的多種結締組織病患者血清進行ELISA檢測，包括系統性紅斑狼瘡(SLE)48例，原發(fā)干燥綜合征(pSS)39例，混合性結締組織病(MCTD)24例，系統性硬化癥(SSc)25例，血清陰性脊柱關節(jié)病(SPA)28例，其他彌漫性結締組織病(CTD)42例，正常對照40例。

3、同時應用國外Anti-RA33 Ab試劑盒以ELISA法檢測并對比檢測結果。比較抗hnRNPA2/RA33抗體在各組人群中的陽性率，并進一步評價該抗體與RA患者臨床指標、實驗室檢查間的關系及在RA早期診斷中的價值。 結果:本研究應用純化的重組hnRNPA2蛋白為抗原，以ELISA方法檢測RA 137例， SLE 48例， SS 39例， MCTD 24例， SSc 25例，SPA 28例，其他CTD 42例，正常對照40例，比較

4、抗hnRNPA2/RA33抗體在各組人群中的陽性率，并進一步評價該抗體與RA患者臨床指標、實驗室檢查間的關系及在RA早期診斷中的價值。結果表明，抗hnRNPA2/RA33抗體在RA患者中的敏感性為37.23％，特異性為85.44％，在SLE、SS、MCTD、SSc、SPA和其他CTD患者中陽性率分別為20.83％、20.51％、25％、8％、3.57％、7.14％，抗hnRNPA2/RA33抗體在RA患者中陽性率明顯高于其他疾病組(p<

5、0.05)。與應用國外Anti-RA33 Ab試劑盒的ELISA法檢測抗hnRNP A2/RA33抗體陽性率比較無明顯差別(P>0.05)，且總體符合率高達86.88％。RA患者的年齡、病程、晨僵時間、血沉、C反應蛋白、關節(jié)功能及X-ray分期在抗hnRNPA2/RA33抗體陽性組與陰性組患者間無顯著性差異(P>0.05)。RA患者中抗hnRNP A2/RA33抗體與類風濕因子(RF)、抗角蛋白抗體(AKA)、抗核周因子(APF)抗體及

6、抗環(huán)瓜氨酸多肽(CCP)抗體無明顯相關性(P>0.05)。 結論: 綜上所述，我們初步純化了RA33抗原，對hnRNPA2進行了基因的克隆、重組蛋白的表達和純化，并以其為抗原，用ELISA方法檢測的抗hnRNPA2/RA33抗體是早期診斷RA的可靠指標，并與國外的Anti-RA33 Ab試劑盒的檢測結果對比無明顯差異，說明我們自制的抗RA33抗體試劑盒可以可靠的應用于臨床檢驗。研究背景:類風濕關節(jié)炎(Rheumatoid

7、 arthritis，RA)是以關節(jié)炎癥和滑膜細胞增殖為特征的全身性自身免疫性疾病，最終造成關節(jié)結構的破壞。趨化因子(Chemokine)是一類可誘導的分泌型細胞因子，在RA患者中，趨化因子對炎性細胞在關節(jié)局部的浸潤過程中具有極其重要的作用，并與滑膜炎、組織破壞及血管新生密切相關。它們的這些生物學功能是通過配體與受體結合的方式來發(fā)揮的，而趨化因子受體3(chemokine receptor 3，CXCR3)是RA中趨化因子的標志性受體。

8、 研究目的: 研究建立實時熒光定量(RFQ)-PCR法測定外周血單個核細胞CXCR3 mRNA含量的方法；檢測CXCR3在RA患者外周血單個核細胞(PBMC)中的表達水平，并與其他結締組織病(CTD)患者和健康人群進行對照，進而探討CXCR3在RA疾病發(fā)生和發(fā)展過程中所發(fā)揮的作用；探討CXCR3的表達水平與其他臨床常用指標的相關性，希望能為RA尋找到能判斷病情活動和預測預后的簡便的參考指標。 研究方法:

9、連續(xù)選取2006年12月-2007年3月在北京協和醫(yī)院風濕科門診或住院的病歷資料完整的RA患者51例，并將其分為活動期和緩解期(其中活動期28例、緩解期23例)，其他CTD患者29例，健康對照組為32例，均符合各自的納入標準與排除標準。設計特異性的引物，用反轉錄(RT)-PCR擴增目的片段實時檢測產物的熒光強度，用所建立的RFQ-PCR方法檢測113例人群中外周血CXCR3 mRNA表達。 結果:各組的外周血CXCR3 mRNA

10、表達水平3組比較差異具有顯著性(P<0.05)；組間兩兩比較發(fā)現：RA患者在外周血的CXCR3 mRNA的表達水平明顯高于其他CTD組和正常對照組(P<0.05)。在活動期與緩解期RA組的比較中發(fā)現，活動期RA患者CXCR3 mRNA的表達水平也明顯高于緩解期RA患者(P<0.05)。緩解期RA患者組、其他CTD組和正常對照組之間統計學檢驗沒有顯著性差異(P>0.05)。而且活動期RA患者中外周血CXCR3 mRNA表達水平與血沉(er

11、ythrosedimentation，ESR)、C反應蛋白(C reactive protein，CRP)有密切的相關性，且存在正相關關系(P<0.05)。RA患者中外周血CXCR3 mRNA表達水平與類風濕因子(rheumatoid factor，RF)、抗角蛋白抗體(antikeratin antibody，AKA)、抗核周因子(antiperinuclear factor，APF)抗體及抗環(huán)瓜氨酸多肽(cyclical citru