趨化因子CXCL9及其受體CXCR3在肝纖維化損傷中的基因表達變化研究.pdf

1、肝臟纖維化是指肝細(xì)胞發(fā)生炎癥刺激及壞死時，肝臟中的膠原蛋白、糖蛋白和蛋白多糖等細(xì)胞外基質(zhì)的增生與降解失去平衡，導(dǎo)致肝臟內(nèi)纖維結(jié)締組織異常沉積的病理過程。輕者稱為纖維化，重者經(jīng)過反復(fù)持續(xù)的炎癥和壞死影響，纖維不斷增生，伴有肝小葉結(jié)構(gòu)改建、假小葉和結(jié)節(jié)形成，即發(fā)展為肝硬化。肝纖維化是病毒性肝炎等各種慢性肝病導(dǎo)致肝癌的重要途徑?，F(xiàn)階段最有效的治療方法僅限于在肝硬化末期的肝移植。因此確定肝纖維化的產(chǎn)生和發(fā)展機制，以及如何逆轉(zhuǎn)纖維化是當(dāng)前研究的重

2、要內(nèi)容。
　　趨化因子是一類具有細(xì)胞因子功能的趨化分子，在許多組織中起著調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)的作用，在急慢性肝病中，趨化因子一般通過調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞（單核細(xì)胞、T細(xì)胞）在肝臟組織的滲入，以間接的方式參與損傷反應(yīng)。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，趨化因子也可以直接作用于肝細(xì)胞和星狀細(xì)胞等肝臟宿主細(xì)胞，參與炎癥和纖維化損傷應(yīng)答；同時，針對基因敲除動物的研究也表明，單獨的趨化因子和趨化因子受體也能對肝臟的毒性損傷與炎癥反應(yīng)產(chǎn)生影響。
　　本文通過建立肝纖維

3、化損傷和恢復(fù)的實驗動物模型，研究肝臟組織階段性的病理與血清學(xué)指標(biāo)的變化規(guī)律，檢驗?zāi)Ｐ唾|(zhì)量，并研究CXCL9及其受體 CXCR3在肝臟纖維化損傷與恢復(fù)中的表達變化。最后嘗試對CXCR3-/-小鼠建立部分肝臟切除模型，為進一步研究做好鋪墊。
　　誘導(dǎo)肝纖維化模型，采用腹腔注射四氯化碳的方法進行。大鼠按照2ml/kg劑量，腹腔注射四氯化碳與橄欖油1:1的混合溶劑，每周注射2次。2周后改為1ml/kg劑量，直至造模成功；對照組僅注射溶劑。

4、在預(yù)先設(shè)置的若干時間點，部分實驗組動物停止注射四氯化碳，令其進入自恢復(fù)階段。同時處死動物，采集血樣與肝臟組織標(biāo)本，用于血清學(xué)與組織學(xué)分析、定量PCR檢測。
　　隨著四氯化碳反復(fù)多次注射，肝臟纖維化損傷程度也隨之加深，越來越多的細(xì)胞外基質(zhì)沉積，在造模的第12周，肝組織纖維化比例達到40％。在肝臟造模的自恢復(fù)階段初期，細(xì)胞增殖明顯，以期通過降解細(xì)胞外基質(zhì)來重塑肝組織結(jié)構(gòu)，隨后肝臟膠原纖維的比例也慢慢降低至8%。在肝臟纖維化造模過程中，