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文檔簡介
1、本試驗將純化后的β-伴大豆球蛋白(7S)和大豆球蛋白(11S)以不同劑量添加到斷奶仔豬的日糧中,建立仔豬致敏模型。采用ELISA方法檢測斷奶仔豬血清中的免疫球蛋白,石蠟切片、免疫組織化學(xué)的方法檢測仔豬小腸黏膜上皮緊密連接蛋白ZO-1的表達與分布,以及實時熒光定量PCR方法研究大豆抗原蛋白對斷奶仔豬小腸黏膜上皮緊密連接蛋白ZO-1 mRNA相對表達量的影響,探討7S和11S對斷奶仔豬血清IgG亞型及IgE和腸粘膜緊密連接蛋白ZO-1表達的
2、影響。
選取70頭21日齡―杜×長×大斷奶仔豬,隨機分成7組,每組10頭仔豬。對照組(A組)飼喂基礎(chǔ)日糧,β-伴大豆球蛋白(β-conglycinin,7S)B、C、D組和大豆球蛋白(Glycinin,11S)E、F、G組在24 d分別添加500μg·kg-1·W-1、2000μg·kg-1·W-1、5000μg·kg-1·W-1的7S或11S。分別于24、26、28、30日齡采集血液,測定血清中免疫球蛋白含量。試驗結(jié)束時,每
3、組選取5頭仔豬放血致死,采集各段小腸,其中空腸分前、中、后三段采取,置于4%多聚甲醛和液氮中保存,分別用于檢測仔豬小腸黏膜上皮緊密連接蛋白ZO-1的表達與分布和檢測各段小腸ZO-1 mRNA的相對表達量。
試驗結(jié)果表明:
1、大豆抗原蛋白致敏仔豬血清IgG、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4和IgE水平升高,其中7S試驗組高于11S試驗組。
2、大豆抗原蛋白致敏仔豬腸黏膜ZO-1的相對表達量降低,且與7
4、S和11S在仔豬日糧中的添加劑量呈負相關(guān);添加劑量相同的7S組ZO-1的相對表達量低于11S組。
3、各試驗組仔豬腸黏膜緊密連接蛋白ZO-1 mRNA的相對表達量均降低,與7S和11S在仔豬日糧中的添加劑量呈負相關(guān)。添加劑量相同的7S組ZO-1 mRNA的相對表達量低于11S組。
試驗證實,β-伴大豆球蛋白和大豆球蛋對斷奶仔豬有明顯的致敏作用,β-伴大豆球蛋白致敏性高于大豆球蛋白;β-伴大豆球蛋白和大豆球蛋顯著提高致
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